[发明专利]通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其杂质的方法

说明书

本发明公开了一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其杂质的方法，采用以下方式进行：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.005mol/L四丁基溴化铵水溶液‑甲醇为流动相，检测波长为210～310nm，柱温为25～40℃，流动相速度为0.5～2.0mL/min，其中四丁基溴化铵水溶液用磷酸调节pH值为8.0～9.0；样品溶液配制：采用极性溶剂分别配制含雷替曲塞及其杂质各0.1～1.0mg/mL的溶液；测定：将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。利用本发明的方法可以快速准确地进行雷替曲塞原料药及其制剂的有关物质的定量分析，从而保证雷替曲塞的质量可控性。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其杂质的方法。

背景技术

雷替曲塞是由英国的Royal Marsden医院的癌症研究署与Zeneca共同合作开发的药物。它是一种胸腺核苷酸合成酶抑制剂，属于叶酸的衍生物，用于治疗晚期直肠结肠癌患者。1996年在英国首次上市，商品名Tomudex，同年在法国等国家上市。其作为晚期结直肠癌的一线治疗药物，具有毒副作用小、给药方便、价格便宜等优点，在中国的需求量大。

雷替曲塞的结构式如下：

雷替曲塞的主要不良反应包括对胃肠道、血液系统及肝酶的可逆性影响。其中胃肠道系统最常见的不良反应有恶心、呕吐、腹泻及食欲不振。这些不良反应可能是由其中的杂质引起。雷替曲塞合成过程中的起始原料、中间体、终产物类似物以及降解产物等均可能成为其杂质，从而影响产品的质量。因此，对原料药及制剂进行质量控制一直是药物研发工作中的重点和难点。

本申请的发明人对雷替曲塞合成过程中可能引入的杂质进行了深入研究，杂质的结构如下表所示：

杂质A是雷替曲塞合成过程中的中间体(5-氨基噻吩-2-羰基)-L-谷氨酸二乙酯的水解物，杂质C、D、E、F是合成的副产物，杂质G(5-硝基-2-噻吩甲酸)和杂质H(6-溴甲基-3,4-二氢-2-甲基-喹唑啉-4-酮)为合成雷替曲塞的起始原料。因此，对这七个相关物质的定量控制具有重要意义。

文献“注射用雷替曲塞的质量控制”(中国医院药学杂志，2009，29(12):1003-1005)公开了以缓冲液(含0.03mol/L磷酸氢二钾及0.03mol/L三乙胺，磷酸调pH7.2)-甲醇(68：32)为流动相用高效液相色谱法测定雷替曲塞制剂中有关物质的方法。

文献“高效液相色谱法测定雷替曲塞的含量”(抗感染药学，2008，5(1)：19-21)公开了以甲醇：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(42：58，用磷酸调节pH值2.5)为流动相用高效液相色谱法测定雷替曲塞含量及有关物质的方法。

文献“高效液相色谱法测定大鼠血浆中雷替曲塞浓度”(药物分析杂志，2005，25(7):778-780)公开了以1％醋酸-甲醇-乙腈(60：25：15)为流动相用高效液相色谱法测定大鼠血浆中雷替曲塞浓度的方法。

目前尚未见关于雷替曲塞与上述七个杂质的分离测定方法的文献报道。亦无文献公开杂质C和杂质F的结构以及在雷替曲塞原料药或制剂中对其进行质量控制的方法。因此，开发一种分离测定雷替曲塞与该七个杂质的方法对于控制雷替曲塞的质量，提高药品疗效、降低毒副作用是非常必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其杂质的方法，可以对雷替曲塞及其相关的杂质进行分离测定。

所述的相关杂质可选自杂质A、C、D、E、F、G、H，其具体的化学结构及分子式如前所述。

本发明是通过以下技术手段实现的：