[发明专利]一种提高卷枝毛霉产油量的制备方法

说明书

本发明涉及一种提高卷枝毛霉油脂产量的制备方法，属于基因工程领域，本发明从卷枝毛霉菌株WJ11克隆获得三羧酸转运体TCT基因，连接至整合型质粒pMAT1552上，转化到卷枝毛霉缺陷型菌株Pleu‑Mu402中，通过同源重组将TCT基因整合到卷枝毛霉的基因组上，得到重组菌株Mutct，最终实现了TCT基因在卷枝毛霉中的过量表达，重组菌株Mutct中油脂含量比对照菌Mc1552提高了45.1%，胞内油脂含量可以达到总生物量的15.24%。

技术领域

本发明涉及一种提高卷枝毛霉产油量的制备方法，属于基因工程领域。本发明通过同源重组技术过量表达三羧酸转运体（TCT）基因，大大提高卷枝毛霉中的油脂产量。

背景技术

产油微生物是指能够利用碳源，如碳水化合物、碳氢化合物等，产生大量脂肪酸并以甘油三酯的方式储存在自身体内，并且产油量占其生物总量的20%的微生物。在产油微生物中，不同种类的微生物产油脂量相差巨大，积累量从占细胞干重的20%到80%不等。现如今，随着科技进步和人口的增长，人类社会对于油品的需求日益增加，但与此同时，石油资源的日益紧缺、石油价格的不断上涨以及环境污染等问题也同时出现。通过微生物产生的油脂以及其衍生品来代替部分石油资源，是解决资源短缺问题、实现可持续发展的一剂良方。

卷枝毛霉是全球首次利用微生物商业化培养生产油脂的菌株。卷枝毛霉 CBS277.49菌株（已得到基因组全序列）产油率不到25%，新菌株WJ11所产生的脂质可以占到细胞干重的36%。卷枝毛霉能够大量产生γ-亚麻酸 (GLA)，这也是其主要的商业价值。GLA是一种重要的多不饱和脂肪酸，是ω-△6系列的十八碳多不饱和脂肪酸， GLA在生殖系统、免疫系统、内分泌系统和心血管系统中扮演着重要角色。

三羧酸转运体TCT基因是脂质合成的关键因素之一。产油真菌通常在碳源充足，其它营养成分（如氮、磷、硫等）缺乏的条件下积累大量脂质。在此条件下，细胞不再进行繁殖，而是将过量的碳源转化为脂肪酸，并且以甘油三酯的形式储存在体内。卷枝毛霉是研究微生物产脂的模式菌株，利用同源重组的基因工程方法来提高卷枝毛霉油脂产量，为大力推广卷枝毛霉的工业化应用提供指导，并且能够用微生物油脂或其衍生品代替一定的石油制品，符合可持续发展的要求。

发明内容

本发明提供一种卷枝毛霉重组菌株Mutct，包括三羧酸转运体（TCT）基因在卷枝毛霉基因组上的整合并过量表达，与对照菌Mc1552相比生成的胞内油脂产量提高了45.1%，胞内油脂含量可以达到总脂肪酸的15.24%。