[发明专利]Hsa-miR-17基因启动子区及其PCR扩增鉴定引物组和反应体系

说明书

本发明公开了一套能有效扩增Hsa‑miR‑17编码基因启动子区的PCR扩增及Sanger测序鉴定引物及其配套反应体系，主要包括三方面的特征：（1）特殊的5’加尾PCR引物，序列如SEQ ID NO.1和2所示；（2）在常规PCR扩增体系中添加了终浓度为体积比3～5% DMSO的特殊PCR反应体系；（3）一套可正反向两次鉴定扩增目的片段序列正确性的Sanger测序引物体系，序列如SEQ ID NO.3～10所示。本发明的引物体系和反应体系能有效扩增Hsa‑miR‑17编码基因启动子区片段，并可鉴定整段扩增片段的序列正确性，对于促进Hsa‑miR‑17表达调控的相关研究具有实际意义，具有良好的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一套能有效扩增Hsa-miR-17编码基因启动子区的PCR扩增及Sanger测序鉴定引物及其配套反应体系。

背景技术

MicroRNA（miRNA）是一类内源性、非编码、长度约为18～25bp的小分子单链RNA，其通过与互补的mRNA之3’非翻译区的完全或不完全结合来调控相应mRNA的降解和翻译，从而调控相应蛋白质的表达。miRNA不仅参与了细胞分化、增值、凋亡等生物学过程的调控，也与肿瘤的发生、发展密切相关。启动子区是指位于结构基因5’端上游的一段DNA序列，不同转录因子通过与特异启动子区结合来调控相应基因的表达，从而实现对相应生理或病理过程的调节。因此研究miRNA基因启动子区与特定转录因子间的相互作用对于阐明相应miRNA的表达调控机制进而理清其病理、生理功能具有重要意义。

双荧光素酶报告基因实验是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种经典实验方法，其核心是需构建插入特定基因启动子区DNA片段的双荧光素酶报告基因质粒，而构建质粒的前提则是获得启动子区的DNA片段。因此利用PCR扩增获得有效的启动子区DNA片段对开展相关基因的功能研究具有重要的实用价值。然而在很多基因的启动子区存在如CpG岛等的特殊基因结构，而这些特殊基因结构往往会引起引物的错配或导致局部二级结构的形成从而致使PCR扩增失败。所以通过何种方法来实现启动子区DNA片段的有效PCR扩增及鉴定是相关研究工作常需面对的问题。

另外，Hsa-miR-17在脑胶质瘤、白血病等多种肿瘤组织中高表达且与预后相关，因此Hsa-miR-17是一个重要的潜在癌基因。同时Hsa-miR-17也参与了乳腺癌化疗响应和非小细胞肺癌的靶向治疗耐药，所以其也是一个潜在的肿瘤治疗药物靶点。然而Hsa-miR-17的表达调控以及相关功能尚未完全阐明，因此如上所述，获得有效的Hsa-miR-17启动子区DNA片段对开展Hsa-miR-17的功能研究具有重要的实用价值，对于促进Hsa-miR-17的相关研究具有实际意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一套能有效扩增Hsa-miR-17编码基因启动子区的PCR扩增及Sanger测序鉴定引物及其配套反应体系。

本发明的目的之一是提供一种能有效扩增Hsa-miR-17编码基因启动子区的PCR扩增引物。

本发明另一目的是提供一种能有效扩增Hsa-miR-17编码基因启动子区的PCR扩增体系。

本发明的再一目的是提供一种可正反向Sanger测序鉴定Hsa-miR-17编码基因启动子区序列的引物体系。

本发明的再一目的是提供Hsa-miR-17基因启动子区序列。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种能有效扩增Hsa-miR-17编码基因启动子区的PCR扩增引物，上下游引物如SEQ ID NO.1和2所示。

本发明还提供了一种能有效扩增Hsa-miR-17编码基因启动子区的PCR扩增体系，在常规PCR扩增体系中添加终浓度为体积比3～5%的DMSO。