[发明专利]一种特立帕肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种特立帕肽的制备方法，包括以下步骤：(1)采用树脂为固相载体，与特立帕肽C端氨基酸酯化，制备氨基酸‑树脂复合物；(2)采用Fmoc策略固相多肽合成方法，制备保护的特立帕肽‑树脂复合物；(3)采用切割试剂脱除侧链保护基并将特立帕肽从树脂上裂解下来，乙醚沉淀后得到特立帕肽粗品；(4)采用高效液相法纯化粗品，得到特立帕肽精品。本发明适合简便、高效制备特立帕肽。本发明解决了现有方法复杂、副反应多的问题。

技术领域

本发明属多肽化学领域，特别涉及一种特立帕肽的制备方法。

背景技术

特立帕肽序列为SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF，是一条含34个氨基酸的多肽。特立帕肽由美国礼来公司开发，美国食品药品监督管理局于2002年11月26日批准了特立帕肽用于治疗男人和绝经期妇女的具有高度骨折风险的骨质疏松症，也用于治疗男人的原发和或由于性机能减退造成的具有高骨折风险的骨质疏松。目前的常规骨质疏松药物一般只是作用于破骨细胞而减缓或阻断骨质流失，而特立帕肽这种甲状旁腺激素的衍生物有增加成骨细胞数目、增强其活性及阻止成骨细胞凋亡的作用。因其可增加成骨细胞的活性及数量，从而可以促进骨生长，用于严重骨质疏松的二线治疗。此外特立帕肽副作用很小，通常只是恶心、眩晕和腿痛性痉挛。因此特立帕肽具有很高的药用价值和广阔的市场前景。

特立帕肽的制备主要采用化学法合成。据《合成化学》杂志2007，15(3)：388-390的报道，采用王树脂，以DCC/HOBT为缩合剂，色氨酸用Fmoc-Trp-OH，合成了特立帕肽。此方法中DCC缩合过程中容易产生DCU沉淀，后处理麻烦；氨基酸与王树脂连接时容易发生消旋；色氨酸的侧链不保护，在缩合及切割过程中都会发生副反应，最终的产率只有23.3％。专利CN201210213044.3采用5个多肽片段缩合法合成特立帕肽，工艺复杂，缩合效率低。专利CN201310403743.9采用酯键替代酰胺键的方法合成特立帕肽，该方法中形成酯键的反应效率较低，且酯键不稳定，在重复的Fmoc脱保护反应中易断裂。专利CN201410262511.0采用伪脯二肽，大大增加了合成成本，并提高了工艺复杂性。专利CN201511024053.8采用缩合多个二肽或三肽片段的方式合成特立帕肽，增加了工艺复杂性。专利CN201510005427.5以王树脂或氯树脂为载体，DIC/HOBT为缩合剂合成特立帕肽；其中His、Arg、Asn和Trp侧链活性基团没有被保护，在合成及切割反应中容易发生副反应，且所用的切割试剂无法避免Met(O)杂质的产生。

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、高效的特立帕肽制备方法，解决目前特立帕肽制备繁琐、合成及切割时发生副反应的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种特立帕肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备Fmoc-Phe-树脂复合物：用N,N-二甲基甲酰胺溶解特立帕肽C端第一个氨基酸Fmoc-Phe-OH及酯化试剂后，加入到用N,N-二甲基甲酰胺浸泡处理后的树脂中进行酯化反应，反应结束后，加入树脂体积10倍的甲醇/N,N-二异丙基乙胺混合溶液(体积比为1：1)，室温反应1h后过滤。然后用N,N-二甲基甲酰胺洗涤树脂，得到Fmoc-Phe-树脂复合物；

(2)制备保护的特立帕肽-树脂复合物：向步骤(1)得到的Fmoc-Phe-树脂复合物中加入Fmoc脱保护试剂脱除Fmoc保护基，反应结束后过滤并用二甲基甲酰胺洗涤树脂，然后向Phe-树脂复合物中加入特立帕肽的C端第二个氨基酸和缩合试剂进行缩合反应，缩合反应结束后用二甲基甲酰胺洗涤树脂；按照特立帕肽从C端到N端的顺序，更换氨基酸，重复Fmoc脱保护反应和缩合反应，得到保护的特立帕肽-树脂复合物；

(3)制备特立帕肽粗品：向保护的特立帕肽-树脂复合物中加入切割试剂，脱除多肽侧链保护基并将特立帕肽从树脂上裂解下来，乙醚沉淀后得到特立帕肽粗品；