[发明专利]一种尿酸的无酶比色检测方法

说明书

本发明属于分析化学技术领域，涉及一种尿酸的无酶比色检测方法。本发明首先制备集成化CoP/NF整体式类过氧化物酶，然后以CoP/NF作为类过氧化物酶，催化TMB和过氧化氢溶液的氧化还原反应，产生显色物质TMBox，因TMBox能被尿酸选择性地还原成无色TMB，原显色反应产生的吸光度随尿酸浓度的增加而降低，通过测定最终所得显色物质的吸光度，得到吸光度随尿酸浓度的增加而减少的曲线，根据此标准曲线来确定待测物的尿酸含量。本发明公开的分析方法既不需要过氧化物酶，也不需要尿酸氧化酶，实现了尿酸的无酶检测，检测成本低廉，操作简单；尿酸的检测范围为1～200μM，检测限低至1μM；对尿酸的响应灵敏，具有良好的特异性，可实现对血清和尿液中尿酸的准确分析。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，涉及尿酸的检测方法，尤其涉及一种尿酸的无酶比色检测方法。

背景技术

成年人尿液中正常的尿酸浓度为149～446mmol/L，血清中为0.15～0.4mmol/L，尿酸是人体中嘌呤代谢的最终产物之一，大部分随尿液排出。当体内的尿酸浓度过高或过低时容易引发诸多疾病，如痛风性关节炎、继发性高血压、脑梗死、输尿管结石和肾脏疾病等，严重时可能会造成肾衰而危及生命。因此，人体血液和尿液中尿酸的准确检测成为相关疾病诊断和预防的重要手段。

在临床实践中，尿酸的检测通常通过尿酸氧化酶与天然过氧化物酶的结合来实现。尿酸氧化酶首先将尿酸催化氧化成尿囊素，同时产生H₂O₂中间体，然后由天然过氧化物酶催化H₂O₂发生相关反应，再利用电化学方法或光学方法来进行检测。这种尿酸氧化酶-过氧化物酶偶联方法为尿酸的检测提供了良好的选择性和灵敏度，现有技术包括：

中国专利CN106404758A(一种检测尿液中尿酸含量范围的试纸)公开了一种利用显色反应检测尿液中尿酸浓度的试纸条。在试纸基材上粘附有酶显色剂(主要成分为尿酸酶和辣根过氧化氢酶、显色剂)、胆红素氧化酶、竹纤维，试纸的制备过程耗时，且由于酶和显色剂的使用，试纸需要低温避光保存。

中国专利CN103267783A(一种检测过氧化氢、尿酸或尿酸酶的方法)公开了一种电化学检测尿酸的方法，利用尿酸酶氧化尿酸产生的过氧化氢与芳基硼化物反应，产生具有较高电化学活性的酚类化合物，从而通过电化学的方法检测酚类化合物，间接得到尿酸的含量。

中国专利CN105424659A(利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系)公开了一种以氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量的方法。

然而，上述公开的检测方法有着共同的不足之处在于，需要一种或多种天然酶参与，对检测过程的环境要求苛刻；成本相对较高，操作相对复杂，试剂保存条件要求高。因此，开发一种操作简便、成本低廉、适用性强的尿酸检测装置具有重要的意义。

发明内容

针对上述现有技术中存在的不足，本发明的一个目的，公开了集成化CoP/NF整体式类过氧化物酶的制备方法。

集成化CoP/NF整体式类过氧化物酶的制备方法，包括如下步骤：

1)将商品化泡沫镍剪成1cm²大小，先后用37％的盐酸浸泡30min和去离子水超声清洗10min，然后60℃恒温干燥，得到纯净的泡沫镍；

2)将摩尔比为1：1～7的硫酸钴和尿素溶解到30～150mL去离子水中，优选摩尔比为1:6.4，搅拌10～30min混合均匀，优选20min；

3)将处理好的泡沫镍(30片)与上述溶液置于水热反应釜中在80～180℃下反应12～48h，优选120℃反应48h，得到Co(OH)₂纳米片阵列修饰的泡沫镍复合物；