[发明专利]一种利用热辅助甲酯化‑气相色谱法测定聚山梨酯80中脂肪酸组成的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种测定聚山梨酯80中脂肪酸组成的方法，特别涉及一种热辅助甲酯化-气相色谱法测定聚山梨酯80中脂肪酸组成的方法。

(二)背景技术

聚山梨酯80系油酸山梨坦和环氧乙烷聚合而成的聚氧乙烯20油酸山梨坦，是一种非离子型表面活性剂，具有高的表面活性，常作为乳化剂、增溶剂和稳定剂被广泛应用于食品、化妆品和药品等。

随着近年来研究的不断深入，药剂中的聚山梨酯80与临床产生的不良反应有关。2015年版中国药典中规定聚山梨酯80的品质主要从以下几个方面进行控制：(1)聚山梨酯80中乙二醇、二甘醇、环氧乙烷、二氧六环等杂质残留量；(2)聚山梨酯80的过氧化值；(3)聚山梨酯80的脂肪酸组成。

2010年版中国药典规定聚山梨酯80的脂肪酸组成成分中，油酸含量不得低于58.0％。随着我国国际化程度的不断加深，为了与欧盟及美国标准相接轨，2015年版中国药典规定除了油酸含量不得低于58.0％以外，对其他脂肪酸的含量做进一步的限定，包括肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、亚油酸与亚麻酸的含量分别不得大于5.0％、16.0％、8.0％、6.0％、 18.0％与4.0％。

目前针对聚山梨酯80的脂肪酸组成测定方法主要有气相色谱法和液相色谱法。药典中采用三氟化硼甲醇加热回流的方法将脂肪酸进行甲酯化处理，然后测定聚山梨酯80的脂肪酸组成。该方法样品前处理步骤复杂，耗时长，消耗大量有机溶剂。文献中报道采用高效液相色谱-电喷雾检测器和高效液相色谱-串联质谱对聚山梨酯80中的脂肪酸组成进行分析，但依然需要采用皂化、萃取等样品前处理方法，同时采用的仪器设备比较昂贵，不利于方法的普及和推广。

热辅助衍生化-气相色谱技术是近年来迅速发展的用于有机酸、醇类、酚类和胺类等物质分析的有效方法。该方法将样品与衍生化试剂如四甲基氢氧化铵(TMAH)等同时加入裂解器或混合后直接注入气相色谱进样口中，目标物中的羧基、羟基、氨基等基团在高温下与衍生化试剂瞬间反应，生成相应的酯类衍生物并立即被载气带入气相色谱系统进行分离分析，过量的衍生化试剂则分解成醇类和胺类，随载气流出色谱柱。该方法无需繁琐耗时的前处理步骤，操作简单、定量准确、灵敏度高，在带极性基团化合物的复杂样品的快速分析中起着越来越重要的作用。

因此本发明拟开发一种操作简单、分析速度快、准确度高的检测方法，用于聚山梨酯80 中脂肪酸组成的测定。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种利用气相色谱法对聚山梨酯80中脂肪酸的甲酯化产物进行定性、定量分析的方法，并在此基础上优化了色谱分离条件、热辅助甲酯化条件等；本发明建立了聚山梨酯80中脂肪酸组成的热辅助甲酯化-气相色谱法的整体分析方案；测定了6种不同纯度的聚山梨酯80样品的脂肪酸组成。

本发明采用的技术方案如下：

一种利用热辅助甲酯化-气相色谱法测定聚山梨酯80中脂肪酸组成的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)精确称取如下脂肪酸甲酯标准品：肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯与亚麻酸甲酯，用甲醇溶解配制成标准品溶液；

推荐所述标准品溶液中，各脂肪酸甲酯标准品的浓度均为0.1mg/mL；

(2)吸取步骤(1)中配制的标准品溶液(推荐进样量1μL)置于样品杯中，将样品杯放入裂解器中，将裂解器置于气相色谱仪进样口处，当裂解炉温度达到250-400℃(优选300℃) 时进样，用气相色谱仪在线检测，得到脂肪酸甲酯标准品的气相色谱图，作为定性分析的依据；

所述气相色谱条件：色谱柱为RB-5(30m×0.25mm×0.25μm)，升温程序为初温50℃，以10℃/min速率升到200℃，保持10min，以5℃/min速率升到250℃，保持10min；进样口温度为300℃，检测器为FID，温度为300℃，分流比30:1；载气为氮气，流速1.0mL/min；

裂解器条件：裂解炉温度：250-400℃(优选300℃)；裂解器与气相色谱仪接口温度300℃；

(3)精密称定聚山梨酯80样品，用甲醇溶解配制成样品溶液，再将样品溶液与衍生化试剂混合，超声混匀得到待测溶液；

推荐所述样品溶液中，聚山梨酯80样品的浓度为10mg/mL；

所述衍生化试剂为0.2mol/L的三甲基氢氧化硫的甲醇溶液；

推荐所述样品溶液与衍生化试剂按体积比1：2混合；