[发明专利]一种利用PIP对生物材料染色的方法有效
申请号: | 201710610328.9 | 申请日: | 2017-07-25 |
公开(公告)号: | CN107290198B | 公开(公告)日: | 2019-07-16 |
发明(设计)人: | 梁静南;刘一苇;赵彤;孙树涛;樊峥;李春立;张晓兰;王前 | 申请(专利权)人: | 中国科学院微生物研究所 |
主分类号: | G01N1/30 | 分类号: | G01N1/30 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100101 北京市朝阳区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 pip 生物 材料 染色 方法 | ||
本发明公开了一种利用PIP对生物材料染色的方法。本发明公开的利用PIP对生物材料染色的方法,包括利用PIP或包括PIP的试剂对生物材料染色完成所述生物材料的染色,PIP的化学结构式如式Ⅰ所示;该生物材料可为微生物,如噬菌体、病毒和细菌,也可为动植物细胞、组织和器官以及其切片。实验证明,PIP不仅可以用于各种生物材料的染色,并且PIP不是危险物质,没有物理或化学的危险性,对健康和环境无危害,还易获得且溶于水,可替换醋酸双氧铀用于生物材料染色。
技术领域
本发明涉及生物技术领域中,一种利用PIP对生物材料染色的方法。
背景技术
透射电镜是利用透过样品的透射电子成像的,生物样品大多数由碳、氢、氧等原子序数较低的原子组成,为了增强样品的反差,利用重金属染色即增加与电子碰撞后产生的散射角的方式来增加样品的衬度。根据重金属对成像发挥作用方式的不同,染色方法分为负染色和正染色两种染色方法。负染色多用于完整小颗粒的观察,利用较高电子密度的重金属盐类包围在样品周围,以便在电子致密的灰黑色背景中反衬出低电子密度的样品,从而达到增强反差的目的;正染色主要针对切片类(将完整的细胞切成70nm左右的切片,看其细胞内部结构)样品,利用各种细胞器或者大分子吸附重金属数量或者种类的不同,从而将细胞不同结构特征呈现出良好反差。
对于切片类样品通常要经过醋酸双氧铀—柠檬酸铅双染法。柠檬酸铅是广谱的切片染料,对大多数细胞结构如细胞壁、细胞膜、线粒体、内质网等膜类结构都有良好的染色效果,但对核酸遗传类物质染色效果较差,而醋酸双氧铀对细胞核染色效果尤佳。
目前在生物透射电镜观察中,醋酸双氧铀是无论在负染色还是正染色中都被广泛使用的染色剂。但由于它具有放射性,试剂管理和废液处理一直是不能轻视的问题,此外目前该试剂已处于严格管制阶段,大多数科研单位除了原有库存,很难买到该试剂。
发明内容
本发明提供了一种利用Di-μ-iodobis(ethylenediamine)diplatinum(II)nitrate(简称PIP)对生物材料进行染色的方法。
本发明提供的生物材料染色方法,包括利用PIP或包括PIP的试剂对生物材料染色完成所述生物材料的染色,PIP的化学结构式如式Ⅰ所示:
所述试剂的活性成分可为PIP,也可为由PIP和具有生物材料染色功能的物质组成的组合物。
所述试剂还可包括柠檬酸铅。
所述试剂具体可由PIP与柠檬酸铅组成。
在具体染色时,可先将PIP溶于水中,将得到的PIP水溶液对所述生物材料进行染色。所述染色可将所述PIP水溶液直接滴至所述生物材料上完成染色。所述PIP水溶液中PIP的浓度可根据具体需要进行调整。在本发明的实施例中所用到的PIP水溶液中PIP的浓度为0.01%(质量百分比)-1%(质量百分比),具体为0.01%(质量百分比)、0.5%(质量百分比)和1%(质量百分比)。
上述方法中,所述生物材料均可处于具有导电功能的金属制品上,如金属网。所述金属网可为铜网。
本发明还提供了PIP或所述试剂的下述M1)或M2)的应用:
M1)在生物材料染色中的应用;
M2)在制备生物材料染色产品中的应用。
本发明中,所述生物材料可为微生物。所述微生物具体可为噬菌体、病毒或细菌。
所述生物材料也可为下述A1)-A6)中的任一种:
A1)植物细胞或其制品;
A2)植物组织或其制品;
A3)植物器官或其制品;
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