[发明专利]一种黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)胶体金标记物的制备：用胶体金标记抗黄曲霉素B1单克隆抗体和第二种属动物蛋白；获得胶体金标记物；

(2)金标微孔的制备：用pH为7～7.5的PBS缓冲液溶解步骤(1)的胶体金标记物，3～5℃、9000～11000r/min离心15～25min，取沉淀，用含8～12g/L第二种属动物蛋白的PBS缓冲液重悬，获得免疫胶体金溶液，此时胶体金标记物浓度为5～10g/L，取20～30μL免疫胶体金溶液点样于微孔反应板中，预冻3～5h，冻干10～18h，得到金标微孔；

(3)检测线和质控线的制备：将黄曲霉素B1-第二种属动物蛋白偶联物喷在硝酸纤维膜的检测线上，将第二种属动物蛋白的IgG喷在硝酸纤维膜的质控线上，干燥；其中，质控线上包被的抗第二种属动物蛋白的IgG的浓度≥检测线上包被的黄曲霉素B1-第二种属动物蛋白偶联物的浓度，干燥，制得硝酸纤维膜；

(4)试剂条的组装：将样品垫、步骤(3)获得的硝酸纤维膜、吸水垫依次首尾搭接并固定于PVC底板上，其中硝酸纤维膜上的检测线靠近样品垫一端，质控线靠近吸水垫一端，切裁制得试剂条；

(5)将试剂条和金标微孔装入盒中，即得黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，胶体金标记物的制备方法为：将胶体金溶液调节pH至7.5～8.5；加入抗黄曲霉素B1单克隆抗体，搅拌25～35min，加入第二种属动物蛋白，搅拌10～20min，加入聚乙二醇20000，搅拌10～20min，此时，胶体金溶液中胶体金颗粒浓度为0.5～0.15g/L，抗黄曲霉素B1单克隆抗体浓度为15～25mg/L，第二种属动物蛋白浓度为1～2g/L，聚乙二醇2000浓度为1.5～2.5g/L；然后4℃、3500～4500r/min离心12～18min，取上清液，然后4℃、9000～11000r/min离心15～25min，取沉淀，即得胶体金标记物。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，质控线上黄曲霉素B1-第二种属动物蛋白偶联物浓度为0.3～0.5mg/mL，检测线上抗第二种属动物蛋白的IgG的浓度为0.3～0.5mg/mL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：胶体金的制备方法为柠檬酸三钠还原法。

5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于：胶体金颗粒直径为25～35nm。

6.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于：第二种属动物蛋白为非抗体来源的蛋白质。

7.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于：第二种属动物蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白或人血清白蛋白。

8.一种黄曲霉素B1的胶体金免疫检测试剂盒，包括试剂条和金标微孔；所述试剂条包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾搭接并固定于PVC底板上，所述硝酸纤维素膜靠近样品垫一端设有检测线，远离样品垫一端设有质控线，所述检测线上包被有黄曲霉素B1-第二种属动物蛋白偶联物，所述质控线上包被有抗第二种属动物蛋白的IgG，质控线上包被的抗第二种属动物蛋白的IgG的浓度≥检测线上包被的黄曲霉素B1-第二种属动物蛋白偶联物的浓度；所述金标微孔中包被有胶体金标记的第二种属动物蛋白和抗黄曲霉素B1单克隆抗体；其特征在于：按照权利要求1～7任一项所述的制备方法制备。

9.一种黄曲霉素B1的检测方法，其特征在于：采用权利要求8所述的试剂盒检测，包括如下步骤：

将待测样品溶解，形成样品液，取150μL样品液加入到金标微孔中，静置2min后，混匀，将金标微孔中的全部液体转移到试剂条的样品垫上，10～15min后判读结果；

判断方法如下：

阴性：检测线显色比质控线深或一样深，表示待测样品中无黄曲霉素B1存在或黄曲霉毒素B1浓度低于检出限；

阳性：检测线显色明显比质控线浅，表示待测样品中有黄曲霉素B1存在；

强阳性：检测线无显色，表示待测样品中有较多的黄曲霉素B1存在；

无效：质控线不出现。