[发明专利]聚合酶组合物、制备和使用所述聚合酶组合物的方法有效
| 申请号： | 201710614722.X | 申请日： | 2012-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN107326079B | 公开（公告）日： | 2021-04-20 |
| 发明（设计）人： | P·范德霍恩;T·尼基弗罗夫;罗国斌;M·兰狄斯;D·马祖尔;E·托泽;T·林斯库姆 | 申请（专利权）人： | 生命技术公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12N9/12 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 刘晓东 |
| 地址： | 美国加*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 聚合 组合 制备 使用 方法 | ||
1.一种用于进行核酸扩增的方法，包括：
产生具有修饰的聚合酶、引物、核酸模板以及一个或多个核苷酸的扩增反应混合物，其中所述修饰的聚合酶由选自D732R、E471K或E745Q的氨基酸取代修饰的SEQ ID NO:15所示序列组成，所述修饰的聚合酶相对于SEQ ID NO:15所示序列的参照聚合酶具有增加的解离时间常数；和
将扩增反应混合物经历扩增条件，其中使用所述修饰的聚合酶将所述一个或多个核苷酸的至少一个聚合至引物的末端。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述扩增条件包括高离子强度溶液的存在。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述高离子强度溶液含有100mM至500mM的盐。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述盐包括NaCl和/或KCl。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述修饰的聚合酶中氨基酸取代是D732R。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述修饰的聚合酶中的氨基酸取代是E745Q。
7.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述修饰的聚合酶中的氨基酸取代是E471K。
8.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述核酸扩增反应是克隆扩增反应。
9.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述扩增条件包括通过乳液聚合酶链式反应扩增所述核酸模板。
10.一种修饰的聚合酶，其由选自D732R、E471K或E745Q的氨基酸取代修饰的SEQ IDNO:15所示氨基酸序列组成，所述修饰的聚合酶相对于SEQ ID NO:15所示的序列的参考聚合酶而言具有增加的解离时间常数。
11.如权利要求10所述的修饰的聚合酶，其中所述修饰的聚合酶中氨基酸取代是D732R。
12.如权利要求10所述的修饰的聚合酶，其中所述修饰的聚合酶中氨基酸取代是E745Q。
13.如权利要求10所述的修饰的聚合酶，其中所述修饰的聚合酶中氨基酸取代是E471K。
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