[发明专利]一种Lasiodiplodia iranensis菌及其发酵产茉莉酸的方法

说明书

本发明公开了一种Lasiodiplodia iranensis菌及其发酵产茉莉酸的方法，属于生物技术领域。本发明提供一株可以产茉莉酸的菌株DWH‑2，经ITS鉴定为Lasiodiplodia iranensis，该菌已于2017年5月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2017288。DWH‑2在固体培养基上培养4～5天，转接发酵培养基中静止发酵6～10天，可以产生1500mg/L以上的茉莉酸。本发明提供了一种用微生物发酵法产茉莉酸的方法，与化学合成方法相比，具有很大的优势。

技术领域

本发明涉及一种Lasiodiplodia iranensis菌及其发酵产茉莉酸的方法，属于生物技术领域。

背景技术

茉莉酸化学名称3-氧-2-2′-顺-戊烯基-环戊烷-1-乙酸，分子式C₁₂H₁₈O₃，分子量210.27。是一种新型的植物激素，在植物的花、茎、叶、根等组织与器官中普遍存在，在植物的生长发育过程中发挥着重要的作用。同时作为第二信号，在植物受到生物与非生物的伤害时诱导激活植物体内的防御基因，抵御外界的伤害。并且因茉莉酸及其甲酯具有清淡、幽雅的香味，所以其可作为很多香花精油主香的成分，广泛的应用于香料业的产生中。在农业生产中，茉莉酸类物质能明显的促进不育植株开花还可以用来提高植物的抗旱性，同时茉莉酸类物质可以诱导植物产生有毒物质、害虫蛋白酶抑制剂等来达到抗虫害的效果，在农业生产中可以用其来代替部分杀虫剂。

目前茉莉酸的制备方法主要有三种，从植物中提取、化学合成及微生物发酵法。植物中茉莉酸含量在1^-9～10^-6g/g，因此，从植物中提取的量少，满足不了当前的需求。化学法根据起始原料不同，分为顺-4-庚烯酸为起始原料、乙酸乙酯为起起始原料、及2-环戊烯-1-乙二醇缩酮和2-甲基-1,3-丁二烯为起始原料的方法，但这些方法的反应收率不高(30％以下)，反应条件苛刻，并且合成的茉莉酸都是外消旋物，限制了其使用的范围。

微生物发酵法是通过真菌发酵生产茉莉酸。Aldridge等最早从真菌可可毛色二孢Lasiodiplodia theobroma培养液中分离出游离的茉莉酸(J.Chem Soc Chem Coummum.1971,13:1623),这说明某些微生物具有分泌茉莉酸的可能。美国专利US20020110881A1公开了棉色二孢(Diplodiagossypina)发酵产茉莉酸、茉莉酸甲酯及茉莉酸异构体的方法，其中， D.gossypina ATCC 10936产茉莉酸浓度可达1.2g/L。国内，韩晓敏等为检测可可毛色二孢菌对白木香产生倍半萜的诱导作用，采用气质联用在其PDA培养液中检测到茉莉酸类化合物 (中国中医药杂志，2014，39(2)：192-196)，但其中茉莉酸甲酯含量不高(250mg/L)，同时没有进行相关发酵生产方面的研究。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一株Lasiodiplodia iranensis DWH-2，可以产生茉莉酸。本发明对变质果蔬及玉蕊、拉贡木、海桑、水黄皮、玉米、棉花等植物的腐烂部位上的微生物进行分离，筛选得到分泌茉莉酸的菌株DWH-2，经分子鉴定属于一株L.iranensis 菌，其产量明显高于一般野生菌株，通过优化培养基和培养条件进一步提高了产物浓度。所述L.iranensis DWH-2已于2017年5月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为 CCTCC NO：M2017288。

所述DWH-2的活化培养，可将菌株接于PDA平板上，放置在25～28℃的培养箱中活化 4～5天。

所述DWH-2在PDA平板上，菌落生长初期为白色，且日生长量较快，生长到第四天时平板背面开始出现绿色，生长到第六天时培养基开始变成黑色，生长到第九天时培养基完全变成黑色。在电镜下观察，发现该菌的菌丝体有横隔，且为多核。