[发明专利]一种光响应细胞外基质复合薄膜及其制备方法

权利要求书

1.一种光响应细胞外基质复合薄膜，其特征在于，该复合薄膜由细胞外基质与光响应纳米颗粒组成，其中光响应纳米颗粒的含量为1~100μg/cm³，所述的复合薄膜具有均匀致密的纤维网状结构；所述的光响应纳米颗粒为TiO₂纳米颗粒，直径为10~50 nm；所述薄膜的制备方法包括如下步骤：

(1) 对具有TiO₂纳米点薄膜的细胞培养表面进行灭菌处理；

(2) 将事先培养在培养瓶中的细胞进行脱壁处理，以800~1300r/min离心2~6min后，用培养基混悬，并用计数板计数，以1×10⁵~1×10⁶细胞密度将细胞接种于步骤（1）的细胞培养表面上，置于二氧化碳培养箱内进行单层高密度培养，2~4天后进行第一次换液，之后每1~3天换液一次，整个培养周期5~10天，在细胞脱附前1~3天加入1~100 μg/mL TiO₂纳米颗粒，最终在细胞培养表面上形成完整的细胞片层；

(3) 将经步骤（2）培养后的细胞培养表面移入PBS中，通过波长365nm的紫外光光照5~30min，使细胞片层从细胞培养表面上完整脱附，获得一层完整的细胞片层，用PBS缓冲液以及去离子水对脱附后的细胞片层反复清洗，用固定剂对细胞片层进行固定，避光处理30~60min，再用PBS缓冲液以及去离子水对细胞片层反复清洗；

(4) 将细胞片层浸泡于去离子水中，置于-80℃冷冻30~60 min，取出后在25~37℃解冻20~45 min，冷冻-解冻过程循环重复3~10次，之后用去离子水清洗，获得光响应细胞外基质复合薄膜。

2.根据权利要求1所述的光响应细胞外基质薄膜，其特征在于，步骤（3）中所述的固定剂为甲醛、多聚甲醛、戊二醇、乙醇、丙醇或丁醇。