[发明专利]抗CD20抗原的嵌合抗原受体及其应用

权利要求书

1.抗CD20抗原的嵌合抗原受体，其特征在于，由识别CD20抗原的多肽scFv，铰链区，跨膜区和胞内信号域依次连接组成；所述识别CD20抗原的多肽scFv的氨基酸序列如SEQ IDNO.14所示，所述铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22所示，所述跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24所示，所述胞内信号域由CD28、CD137和CD3ζ依次串联而成或由CD28、CD3ζ依次串联而成。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述CD28的氨基酸序列如SEQ IDNO:25所示，所述CD137的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示，所述CD3ζ的氨基酸序列如SEQID NO:27所示。

3.根据权利要求1-2任一项所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列由SEQ ID NO.14、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27序列依次串联而成。

4.权利要求1-2任一项所述的嵌合抗原受体的慢病毒载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)合成抗CD20抗原的嵌合抗原受体的嵌合抗原受体的基因序列：合成依次含前导肽、抗人抗CD20抗原的不同的单链抗体ScFv、铰链区、跨膜区和胞内信号域；所述铰链区核酸序列如SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:8所示，跨膜区核酸序列如SEQ ID NO:10或31所示，胞内信号域核酸序列如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13所示；

2)构建表达嵌合抗原受体的慢病毒载体：设计引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:29所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:30所示，以所述嵌合抗原受体的序列为模板进行PCR扩增，得DNA片段；

将所述DNA片段的基因序列用限制性内切酶NheI和SalI双酶切，同时用限制性内切酶NheI和SalI酶切慢病毒表达载体pCDH-CAG，然后将酶切后的目的片段和慢病毒表达载体片段通过T4连接酶进行连接，获得表达嵌合抗原受体的慢病毒载体。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)之后，包装并纯化所述慢病毒载体。

6.权利要求5所述的制备方法所得的慢病毒载体。

7.权利要求6所述的慢病毒载体感染的T细胞。

8.权利要求7所述的T细胞在用于制备治疗B细胞淋巴瘤的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述B细胞淋巴瘤的细胞或组织能够表达CD20。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述B细胞淋巴瘤包括非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病。

11.权利要求1所述识别CD20抗原的多肽scFv的氨基酸序列在用于制备治疗B细胞淋巴瘤的药物中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述的B细胞淋巴瘤的细胞能够表达CD20。

13.权利要求1所述识别CD20抗原的多肽scFv的氨基酸序列在用于制备精准捕获能够表达CD20的B细胞淋巴瘤细胞的载体中的应用。

14.如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列在制备CAR-T骨架中的抗原识别域的应用。