[发明专利]一种合成PT141的方法

说明书

本发明涉及医药合成领域，公开了一种合成PT141的方法。本发明所述方法先固相合成PT141线性肽；然后将线性肽加入到缓冲液中，采用嗜热杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、A2胰凝蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、Butelase1酶中的一种或两种以上进行环化，获得PT141。本发明改变常规方法采用偶联试剂和活化试剂的环化方式，以全新的酶制剂环化方式应用到PT141的合成中，获得较高纯度和收率的PT141，同时所述方法能够以普通的保护氨基酸和裂解试剂进行合成，应用范围更广，方法更简便，对环境友好。

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成PT141的方法。

背景技术

PT141，即布雷默浪丹(Bremelanotide)，是一种alpha-黑素细胞刺激激素类似物，由美国Palatin公司开发的一种治疗性功能障碍的环肽类药物，目前处于临床III期。PT141为人工合成的氮端乙酰化环七肽化合物，C端为羧酸，肽序见式I，Cas：189691-06-3。

Ac-Nle-Cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH

式I

目前，合成PT141方法主要为固相合成法，以Fmoc-Asp(OAllyl)-OH和Fmoc-Lys(Alloc)-OH为原料进行合成，但是在合成过程中存在保护氨基酸和脱保护试剂昂贵以及采用HF裂解方式对设备要求较高，并且对环境污染也较严重的问题。

中国专利CN101857629A公开了一种合成PT141的方法，其采用了较为普通的保护氨基酸以及TFA切割试剂进行固相合成，虽然避免了上述固相合成工艺的一些缺点，但是整个工艺的收率难以令人满意。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成PT141的方法，使得所述方法能够提高PT141的收率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种合成PT141的方法，包括以下步骤：

步骤1、固相合成PT141线性肽；

步骤2、将线性肽加入到缓冲液中，采用嗜热杆菌蛋白酶(30～175u/mg)、木瓜蛋白酶(1.5～10u/mg)、A2胰凝蛋白酶(1000u/mg)、胰蛋白酶(10000u/mg)、枯草杆菌蛋白酶(1500u/mg)、Butelase 1酶(5000u/mg)中的一种或两种以上进行环化，获得PT141。

本发明在获得PT141线性肽后，改变传统的采用化学试剂进行环化的策略，采用酶制剂进行环化，提高了PT141的收率和纯度。

作为优选，所述缓冲液为pH2-9的PBS缓冲液(磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制)，更优选为pH值5-7的PBS缓冲液；在具体实施方式中，可采用pH值6.0的PBS缓冲液。

作为优选，所述环化在0-100℃进行，更优选为10-35℃；在具体实施方式中，所述环化在30℃进行。

作为优选，所述线性肽与酶的质量比为100:1～1000:1；在具体实实施方式中，所述线性肽与酶的质量比为300:1。

本发明所述PT141线性肽可以按照现有方法进行合成，在本发明中给出如下较优方法：

步骤1.1、固相合成在PT141线性肽所示氨基酸序列的Lys侧链上、Trp侧链上、Arg侧链上、His侧链上以及Asp侧链上偶联有保护基，且在PT141线性肽所示氨基酸序列C端偶联有树脂以及在N端乙酰化的PT141线性肽树脂；

步骤1.2、向PT141线性肽树脂加入裂解液脱除树脂以及各氨基酸侧链保护基，获得PT141线性肽。