[发明专利]一种用于纯化生物抗菌肽的免疫纳米磁性抗体的制备及其应用方法

说明书

本发明公开了一种用于纯化生物抗菌肽的免疫纳米磁性抗体的制备及其应用方法，免疫纳米磁性抗体的制备，包括生物抗菌肽的抗体在醛基，氨基，环氧基，巯基和或酸酐基磁性表面上固定；免疫纳米磁性颗粒的封闭，免疫纳米磁性抗体的应用方法，包括免疫磁性颗粒捕获生物抗菌肽；免疫纳米磁性颗粒上抗菌肽的洗脱。本发明的有益效果是，生物抗菌肽样品纯化分离操作复杂、分离效率低、污染隐患的技术问题，实用性强。

技术领域

本发明涉及生物抗菌肽样品的纯化处理工艺，特别是一种用于纯化生物抗菌肽的免疫纳米磁性抗体的制备及其应用方法。

背景技术

生物抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)具有广谱抗菌活性，可以快速查杀靶标，并且其中很多是纯天然的肽，使它迅速成为潜在的治疗药物。抗菌肽的治疗范围为：革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌、真菌、寄生虫、肿瘤细胞等。目前急需提高抗菌肽的纯度及应用效价。

现有的生物抗菌肽样品的纯化方法存在以下不足：

1、存在环境污染问题，目前提取生物抗菌肽需要使用多种有毒、异味、易挥发的有机溶剂，而目免疫亲和柱操作比较繁琐，需要操作者的实时操作等问题。

2、样品处理容量比较低而且产品受规格限制不能根据需要做调整。目前生物抗菌肽免疫亲和柱多是1ml和3ml两种规格。

3、免疫亲和柱制备和样品纯化操作步骤繁琐同时对样品粗体要求比较高，如免疫亲和柱很容易因为样品颗粒大而造成堵塞，而且在提取时需要0.2或0.45微米的滤膜处理。

4、免疫亲和柱对不同样品的纯化处理效果差别比较大，有的样品回收率不到70％，如一些植物中药或海洋生物的抗菌肽。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种用于纯化生物抗菌肽的免疫纳米磁性抗体的制备及其应用方法。

实现上述目的本发明的技术方案为，一种用于纯化生物抗菌肽的免疫纳米磁性抗体的制备，包括如下步骤：

步骤一、生物抗菌肽的抗体在醛基，氨基，环氧基，巯基和或酸酐基磁性表面上固定，包括如下工艺流程：

(1)取纳米磁性颗粒悬液加入到离心管中，轻摇悬浮；

(2)置于磁力分离架上，磁性分离，弃上清液；

(3)在含有纳米磁珠的离心管内加入共价偶联缓冲液，轻轻悬浮纳米磁珠；

(4)将含磁珠的离心管置于磁力分离架上收集纳米磁珠，弃上清液后，磁珠备用；

(5)在取适量抗体溶液放入到上述已制备的含纳米磁性颗粒的离心管中，放置于20-40摄氏度中，静置15-30分钟，使磁性颗粒和生物抗菌肽抗体达到共价最大偶联；

(6)反应完毕后，磁性分离，弃上清液；

(7)加入纳米磁珠清洗缓冲液，轻摇重悬磁粒；

(8)在磁粒分离架上分离抗体磁珠，放置于室温中，静置1-5分钟，弃上清液，得到免疫纳米磁性颗粒；

步骤二、免疫纳米磁性颗粒的封闭，包括如下工艺流程；

(1)在步骤一中得到的免疫纳米磁性颗粒中加入封闭剂溶液，轻微摇动混合，封闭免疫纳米磁性颗粒上的多余结合位点；

(2)用纳米磁珠清洗缓冲液对封闭后上的免疫纳米磁性颗粒进行多次清洗；

(3)将免疫纳米磁性颗粒悬于纳米抗体磁珠保存缓冲液中，对其进行2-8摄氏度保存。

步骤一中，所述共价偶联缓冲液为0.01-0.1M，pH6-10的硼酸钠、磷酸钾、碳酸钠等的缓冲溶液。