[发明专利]肺癌和肺部结节蛋白特征谱及其构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种肺癌和肺部结节蛋白特征谱及其构建方法与应用。该方法包括：分别从肺癌/肺部结节患者组和健康对照者组的血浆中提取总蛋白，胰蛋白酶酶解，iTRAQ标记，二维液相色谱和串联质谱检测，相对定量分析，获得肺癌/肺部结节相关蛋白特征谱；肺癌相关蛋白特征谱中，肺癌患者组和健康对照者组中表达差异的蛋白为上调蛋白(SAA1、SERPINA1、CRP、IGHG4和CFH)；肺部结节相关蛋白特征谱中，肺部结节患者组和健康对照者组中表达差异的蛋白为上调蛋白(SERPINA1和CRP)和下调蛋白(SAA1、IGHG4和CFH)。本发明有助于研究肺癌和肺部结节生物学本质，对肺癌和肺部结节规范分型有重要意义。

技术领域

本发明属于医学和蛋白质组学领域，涉及一种肺癌和肺部结节蛋白特征谱及其构建方法与应用。

背景技术

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺部结节是一种病因未明的肺部肉芽肿性疾病，近来已引起国内广泛注意。

目前，肺癌的诊断方法有X线检查、支气管镜检查、细胞学检查、剖胸探查术、ECT检查、纵隔镜检查等。然而这些检查存在着各种弊端，或费时费力、或会给病人带来极大痛苦。

蛋白质组学是在1994年由Williams和Wilkins提出的，通过寻找特异性蛋白质，为研究疾病机制提供线索。近年来随着人类蛋白质组学计划的全面启动，蛋白质组学的研究也产生了巨大进展，蛋白质组学研究中应用的定量方法主要有两种，一种是基于传统双向凝胶电泳及染色基础上的定量，另外一种是基于质谱检测技术的定量，包括标记定量技术(iTRAQ)和非标记定量技术(Label free quantification)两种。iTRAQ结合二维凝胶色谱与串联质谱是将iTRAQ同位素标记技术、二维液相色谱技术、串联质谱技术相联用，能对所有蛋白质进行同位素标记，与质谱联用时，信号离子表现为不同质荷比的峰，根据波峰的高度及面积可得到准确的蛋白质定量信息，适合对多样本的平行分析，可用于发现更多与疾病相关的蛋白质。

SAA1：血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A，SAA)是一种急性时限反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子量约12000。在急性时限反应中，经IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，可升高到最初浓度的100-1000倍，但半衰期极短，只有50分钟左右。血清淀粉样蛋白A与高密度脂蛋白(HDL)有关，它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢。血清淀粉样蛋白A一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白A(AA)原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。

SERPINA1：α-1抗胰蛋白酶(Alpha-1-antitrypsin，SERPINA1)是一种糖蛋白。含糖10％～20％，主要由肝脏合成，广泛分布于正常人血清和体液中。它是血清中最主要的蛋白酶抑制剂，对凝血酶、尿激酶等其他酶也有抑制作用；也是一种急性时相反应蛋白，在炎症性疾患时，α-1抗胰蛋白酶可透过毛细血管进入组织液，在炎症局部往往浓度很高，对急性炎性疾病有一定限制作用。

CRP：人类C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)。CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。CRP在健康人血清中浓度很低(<5mg/L)，而在细菌感染或组织损伤时，其浓度显著升高，故被认为其最有价值。