[发明专利]miR216a用于抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移

说明书

本发明公开了miR216a用于抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。本发明提供了miR216a及用于表达miR216a的物质在制备用于抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的产品中的应用。本发明证实了miR216a可以通过靶向调控CDK14的表达从而抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。此外，骨肉瘤患者中miR216a表达下调和CDK14表达呈负相关。因此，miR216a和CDK14有可能成为治疗骨肉瘤预后的新的生物标志物和共同的治疗靶标。本发明对于治疗骨肉瘤具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及miR216a用于抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，特别涉及miR216a在制备通过靶向调控CDK14从而抑制骨肉瘤细胞增殖，侵袭和迁移的产品中的应用。

背景技术

骨肉瘤作为目前最常见的骨恶性病变，发病机制复杂，且容易发生远处转移，最终导致世界范围内的青少年和成人死亡。目前，骨肉瘤尚未发生远处转移的患者5年生存率为60％-80％，而发生远处转以后，则降至15％-30％。当前，化疗联合手术治疗已广泛应用于治疗骨肉瘤患者。然而，虽然骨肉瘤生物学和遗传学研究已取得一定进展，但骨肉瘤患者的临床治疗效果却并未发生明显改善。因此，需找更好的骨肉瘤临床治疗方案并理解其中的作用机制至关重要。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类大小约19-25个核苷酸(nt)的内源性非蛋白编码调控单链小分子RNA，具有高度保守性，一般来源于染色体的非编码区域。miRNA由RNA聚合酶在基因组的不同区域转录形成较长的pri-miRNA。经过核酸内切酶Ⅲ-Drosha及其辅助因子DGCR8的识别和作用，形成60-75nt的miRNA前体(pre-miRNA)。pre-miRNA在RNA-GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin 5作用下，从细胞核进入细胞质。pre-miRNA在第二个核酸内切酶Ⅲ-Dicer的作用下被切割，形成21-25nt的双链miRNA。然后，双链体降解成为单链的成熟miRNA，继而通过基因沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，形成非对称RISC复合物，从而识别靶基因mRNA，阻断翻译过程。miRNA主要通过转录后基因表达调控发挥生物学效应，具有阶段性和组织特异性。miRNA与目标基因mRNA分子的3’端非编码区域(3’-untranslated region,3’UTR)互补匹配结合，导致靶基因mRNA分子翻译表达得到抑制或裂解，进而调节细胞早期发育，参与细胞分化，调控生物体内的基因表达。在各个生物物种之间，miRNA具有高度的进化保守性，在环部可以容许更多的突变位点存在，而在茎部的保守性较强。miRNA绝大部分定位于基因间隔区，并在基因组内以基因簇或单拷贝、多拷贝等多种形式存在。miRNA的转录与其他基因相互独立，可参与调控生物体内多种代谢过程，而其本身并不翻译蛋白质。DNA甲基化修饰、乙酰化修饰、DNA拷贝改变、特定翻译调节和基因位点突变等均可参与miRNA合成过程中蛋白功能，从而调控miRNA在体内的表达。系列改变导致miRNA功能发生变化，并可通过调控细胞信号通路、细胞因子和相关靶基因的表达，参与细胞增殖、凋亡、分化、代谢与发育等，导致自身免疫性疾病、炎症、肿瘤等的发生发展。

细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)作为一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是驱动细胞周期的过渡的关键调节酶，在细胞周期转换控制发挥关键作用。因此，CDK也长期被认为是有前途的癌症治疗靶标。人类基因组编码26个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶从而形成CDK和类CDK的激酶组分；其中的21种被划分为CDK。不同的激酶亚型在癌细胞增殖有关键作用。最近报告显示，CDK能够支持炎症介质的表达。CDK在各种人类癌症都高表达，如胃癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌和结直肠癌，并且与癌症预后密切相关。由此可见，对CDKs的生物学了解是评估与CDK抑制剂临床效果的关键，特别是确定其潜在的治疗和组合策略。CDK14又称作PFTK1(PFTAIRE蛋白激酶1)，虽然在乳腺癌、食管癌、肺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌和卵巢癌中高表达；但是，其在骨肉瘤发生发展的重要作用仍然未知。

发明内容

本发明的目的是提供一种miR216a及其相关生物材料的新用途。