[发明专利]一株适应全悬浮培养的猫肾细胞系F-81 S及其应用

说明书

本发明公开了一株适应全悬浮培养的猫肾细胞系F‑81 S，命名为F‑81S，保藏编号为CCTCC NO：C201799，分类命名为：猫肾细胞悬浮适应株F81S，保藏日期为：2017年6月29日。相对于现有技术，本发明公开的一种适应全悬浮培养的F‑81S细胞培养疫苗病毒自动化程度高，不需要载体介入，可以在无血清或低血清培养基中悬浮培养，解决病毒培养大规模产业化的要求，开发能满足GMP生产技术要求的大规模化生产方法，拥有很好的工业化应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株适应全悬浮培养的猫肾细胞系F-81 S及其应用。

背景技术

随着中国经济的快速增长，宠物行业在近年间高速发展，宠物的饲养数量更是以几何倍数增长。宠物疾病的预防成为人们普遍关注的一个问题，宠物疫苗行业面临前所未有的发展机遇。目前国内动物疫苗企业商品化的宠物疫苗不多，质量参差不齐，主要依赖进口，产品价格昂贵，国内很多单位正着手这一领域产品的开发。另外，我国水貂、狐狸、貉等特产经济动物存养量也是世界第一，随着我国特产经济动物规模化养殖的不断扩大，除了已经发生的老病继续存在外，各种新发疫病不断发生，损失惨重，要搞好特产经济动物疫病防控，就必然对特产经济动物用疫苗产生新的需求，国内很多单位也正在加大这一领域产品的研发生产，宠物疫苗与特产经济动物疫苗将成为动物疫苗市场发展的新天地。

猫肾细胞系F-81细胞，是由猫肾原代细胞通过传代克隆筛选转化而来的工程细胞系，体外培养呈贴壁生长，可进行连续传代培养，F-81细胞对多种宠物病和特产经济动物病病毒比较敏感，如犬细小病毒(canine parvovirus，CPV)、猫泛白细胞减少症病毒(Felinepanleukopenia virus, FPLV)、猫杯状病毒（Feline calicivirus ,FCV）、猫传染性鼻气管炎病毒(Feline infectious rhinotracheitis virus, FIRV)、水貂病毒性肠炎病毒(Minkenteritis virus,MEV)等等，目前广泛应用于这几种疫病疫苗病毒的制备。

随着兽用疫苗行业的发展，疫苗的制备技术也已经从沿袭数年的传统转瓶工艺向生物反应器悬浮技术发展，很多专利均公开了利用纸片载体或微载体细胞悬浮培养方法生产病毒疫苗的方法；依赖载体的悬浮培养技术的应用在一定程度上提高了生产自动化，克服了转瓶工艺技术的众多不足，但本质上还是贴壁培养，仍需要转瓶提供种子细胞，需要添加昂贵的载体，还要增加载体培养消化等步骤，细胞生长仍需要高血清含量的培养基，而且细胞生长受众多因素限制不能最大化生长，细胞密度提高幅度有限，尤其是在工业放大方面有重大的先天缺陷，这限制了该技术的大规模化应用。随着兽用疫苗生产发展自动化、规模化的需求，无载体全悬浮细胞培养技术成为新的发展趋势。生物反应器细胞全悬浮培养技术中，细胞生长不再受载体限制，省掉了载体培养消化等步骤，细胞培养更为简易，更有线性化放大的优势，适于工业化大规模生产，这在宠物疫苗方面也有公开。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种生产成本低、可以规模化放大培养的适应全悬浮培养的F-81 S细胞及其在生产疫苗病毒中的应用。

本发明的目的是以下述方式实现的：

一株适应全悬浮培养的猫肾细胞系F-81 S，命名为F-81S，保藏编号为CCTCC NO：C201799，分类命名为：猫肾细胞悬浮适应株F81S，保藏日期为：2017年6月29日。

如上述的适应全悬浮培养的猫肾细胞系F-81 S在培养疫苗病毒中的应用。

所述病毒为犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒、猫传染性鼻气管炎病毒和水貂病毒性肠炎病毒。

利用适应全悬浮培养的猫肾细胞系F-81 S培养病毒疫苗的方法，包括如下步骤：