[发明专利]MYLK基因作为诊断子宫内膜癌的标志物

说明书

技术领域

本发明属于诊断领域，涉及一种子宫内膜癌的诊断工具，还涉及MYLK基因在制备子宫内膜癌诊断工具中的应用。

背景技术

子宫内膜癌(endometrial carcinoma或carcinoma of endometrium,EC)是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，以来源于子宫内膜腺体的腺癌最常见，为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占女性全身恶性肿瘤7％，在全世界范围不同地区其发病率有差异，是西方工业化国家最常见的妇科恶性肿瘤，北美、北欧地区发病率最高，亚洲日本、印度及中南美等地区发病率较低。我国尚缺乏子宫内膜癌比较详尽的流行病学调查资料，估计与日本发病情况相仿。北美及欧洲发达国家高于发展中国家，前者是后者的10倍，其发病率位于乳腺癌、大肠癌、肺癌之后，是女性全身第四位常见恶性肿瘤，位居女性生殖道恶性肿瘤第一位。

虽然子宫内膜癌症状出现较早、诊断相对较容易。但是在实际临床工作中关于子宫内膜癌的诊断及治疗仍存在一些争议。肿瘤的恶性程度及病变范围，包括手术分期、组织学类型、肿瘤分级、肌层浸润深度、淋巴转移及子宫外转移等与子宫内膜癌的预后有关。因此，早期诊断子宫内膜癌非常重要。目前，子宫内膜癌的诊断主要依据病史及临床表现，B超、CT及MRI等影像学检查，诊断性刮宫，宫腔镜，肿瘤标志物CA-125等辅助检查。其中CA-125还可以作为疗效观察的指标。但CA-125的缺乏组织敏感性和特异性，在卵巢上皮性肿瘤、子宫内膜癌、子宫内膜异位症、消化系统肿瘤等疾病中均可检测到CA-125水平升高。

近年来，基因诊断成为了体外诊断行业新的发展趋势。基因诊断，又称之为DNA诊断或分子诊断，是应用分子生物学方法，检测患者体内遗传物质结构或表达水平的变化，继而做出诊断的技术，它为疾病的预防、预测、诊断、治疗和疾病转归提供更为准确的信息。鉴于目前子宫内膜癌诊断方法存在的以上缺陷，急需开发一种价格便宜，操作简便，诊断灵敏度和特异性高的可用于诊断子宫内膜癌的基因诊断的方法。

发明内容

本发明首次发现MYLK基因在子宫内膜癌组织中的含量比正常子宫内膜组织低很多，MYLK基因的差异表达可作为诊断子宫内膜癌的一种方法，据此可以开发诊断子宫内膜癌的工具。

具体的，本发明提供了检测MYLK基因表达的产品在制备诊断子宫内膜癌的工具中的应用。

进一步，上面所提到的检测产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测MYLK基因的表达水平以诊断子宫内膜癌的产品。

进一步，所述用RT-PCR诊断子宫内膜癌的产品至少包括一对特异扩增MYLK基因的引物；所述用实时定量PCR诊断子宫内膜癌的产品至少包括一对特异扩增MYLK基因的引物；所述用免疫检测诊断子宫内膜癌的产品包括：与MYLK蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断子宫内膜癌的产品包括：与MYLK基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断子宫内膜癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与MYLK蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与MYLK基因的核酸序列杂交的探针。

在本发明的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断子宫内膜癌的产品至少包括一对特异扩增MYLK基因的引物的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

优选地，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量测序平台是一种特殊的诊断工具，检测MYLK基因表达的产品可以应用于该平台实现对MYLK基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知MYLK基因的异常与子宫内膜癌相关也属于MYLK基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。

本发明还提供了一种诊断子宫内膜癌的工具，所述产品包括芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。

其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测MYLK基因转录水平的针对MYLK基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的MYLK蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括MYLK基因在内的多个基因(例如，与子宫内膜癌相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括MYLK蛋白在内的多个蛋白质(例如与子宫内膜癌相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与子宫内膜癌的标志物同时检测，可大大提高子宫内膜癌诊断的准确率。