[发明专利]超氧化物歧化酶基因及其编码蛋白有效
申请号: | 201710626682.0 | 申请日: | 2017-07-28 |
公开(公告)号: | CN107217064B | 公开(公告)日: | 2019-09-10 |
发明(设计)人: | 林峻 | 申请(专利权)人: | 福州大学 |
主分类号: | C12N15/53 | 分类号: | C12N15/53;C12N9/02 |
代理公司: | 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 | 代理人: | 戴雨君 |
地址: | 350116 福建省福州市*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 超氧化物歧化酶 基因 及其 编码 蛋白 | ||
技术领域
本发明涉及生物基因领域,具体涉及一种超氧化物歧化酶基因及其编码蛋白。
背景技术
超氧化物歧化酶Orgotein(Superoxide Dismutase,SOD),别名肝蛋白、简称:SOD。它是生物体内重要的抗氧化酶,广泛分布于各种生物体内,如动物,植物,微生物等。SOD具有特殊的生理活性,是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低是衰老与死亡的直观指标。现已证实,由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害,并及时修复受损细胞,复原因自由基造成的细胞伤害。由于现代生活压力,环境污染,各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成,因此,生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要。
超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种类型。第一种是含铜、锌金属辅基的SOD,称为Cu.Zn—SOD,是最为常见的一种SOD酶,呈绿色,主要存在于机体细胞浆中;第二种是是含锰金属辅基的SOD,称为Mn—SOD,呈紫色,存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内;第三种是含铁金属辅基的SOD,称为Fe—SOD,呈黄褐色,存在于原核细胞中。
SOD具有抗衰老、免疫调节、调节血脂、抗辐射、美容等功能,在化妆品、食品、医药学、环境保护等领域具有重要的用途。但是,现有技术中的SOD由于在耐热和抗冻融等方面存在缺陷,极大地限制了SOD的应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种超氧化物歧化酶基因及其编码蛋白,该基因编码的超氧化物歧化酶兼具良好的耐热性和抗冻融性。
本发明所提供的超氧化物歧化酶基因(简称SOD基因),其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了上述超氧化物歧化酶基因所编码的蛋白,其蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明所述SOD基因,是从福建省福州市闽侯县收集的一份自然环境的水样品中,通过宏基因组学技术,用试剂盒提取宏基因组DNA,并直接对提取好的DNA进行PCR扩增得到。
本发明SOD基因编码的超氧化物歧化酶兼具良好的耐热性和抗冻融性,能够广泛应用于化妆品、食品、医药学、环境保护等领域。
附图说明
图1为实施例1步骤1中PCR产物的电泳图谱;
图2为实施例1步骤6的电泳图谱;上排1~6孔:左起:marker、样品6~10;下排1~7孔:左起:marker、阴性对照、样品1~5。
图3为实施例2SOD活性检测结果图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明做进一步说明。以下未注明具体条件的实验方法,按照本领域常规实验条件或者制造厂商所建议的条件。
本发明所述超氧化物歧化酶基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
上述超氧化物歧化酶基因的编码蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明所述SOD基因的来源,是从福建福州闽侯收集的一份自然环境的水样品中,通过宏基因组学技术,用0.22微米的微孔滤膜,通过过滤,截留其中的各种生物,用试剂盒(Mobio牌,PowerDNA Isolation Kit,14900-50-NF,USA)提取宏基因组DNA,并直接对提取好的宏基因组DNA进行PCR扩增得到。
实施例1
通过分子克隆技术,构建SOD基因的蛋白表达载体
1、对提取好的宏基因组DNA做PCR扩增(50μl体系)
PCR体系如下:
Sodinfupet15F:GTTAGCAGCCGGATCCTATTTTATCTGGTTATACCGTCTCTCAACCTCC
Sodinfupet15R:ATATGCTCGAGGATCccATGAAGTTTAGAAGTATAATCCTTGCAGGGC
PCR程序设定如下:94℃预变性10min;(94℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸45s),并设置30个循环;最后72℃延伸5min。
PCR产物采用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定,结果如图1所示,图1左起第一个泳道是marker,第二个泳道是PCR产物,目的条带位置如图1所示。
本实施例所得PCR产物使用sanger法测序(ABI 3730xl测序仪双向测序,测序引物为上述Sodinfupet15F和Sodinfupet15R,由广州英骏生物公司完成),得到本发明所述超氧化物歧化酶基因的的DNA序列,如SEQ ID NO.1所示。
2、胶回收
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