[发明专利]一种具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分及制备和应用

说明书

本发明涉及一种具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分的制备及其应用。本发明以鹿茸为原料，建立了具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分制备方法，该活性组分可应用于阿尔兹海默症等认知障碍疾病的预防和治疗，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分的制备及其应用，所述具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分，可用于治疗或预防神经性退化性疾病如阿尔兹海默症、帕金森症等认知障碍疾病。

背景技术

鹿茸是鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿密生绒毛的未骨化的幼角，始载于汉代的《神农本草经》，入药已有2000多年的历史，其后在历代本草中对鹿茸的药用均有收载。《本草纲目》记载鹿茸能够“生精补髓、养血益阳、强筋健骨，治一切虚损、耳聋、目暗、眩晕虚痢”(文献1：吉静娴,钱璟,黄凤杰,等.鹿茸的活性物质及药理作用的研究进展.ChineseJournal of Biochemical Pharmaceutics,2009,30(2):141-143)。

脯氨酰内切酶(Prolyl Endopeptidase，PEP)，也被称为脯氨酰寡肽酶，是一种高保留的丝氨酸蛋白酶。PEP在含脯氨酸神经肽的新陈代谢中扮演重要角色，PEP的活动与诱导神经退行性疾病(如阿尔兹海默症和帕金森症等)的产生有关。研究表明PEP抑制剂可能会因阻断PEP的新陈代谢而达到改善记忆力的目的。因此，PEP抑制剂可以作为一种潜在的修复阿尔兹海默症患者记忆力的药物进行研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有PEP抑制活性的鹿茸水提物及其应用。鹿茸水提物经过胃蛋白酶和胰酶作用后的酶解产物具有PEP抑制活性，可作为改善阿尔兹海默症等认知障碍疾病药物研发的潜在来源。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

(1)新鲜鹿茸切碎，加入鹿茸质量5～30倍的去离子水，升温至90～100℃(最优范围为95～100℃)，搅拌提取1～5(最优范围为2～4)小时，提取结束后降至室温，用170～270(最优范围为200～230)目的滤网过滤，滤液即为提取物。

(2)用1～6M的HCl将提取物的pH调至1.0～5.0(最优范围为1.5～2.0)，搅拌均匀后加入鹿茸质量0.1～5.0％(w/w)(最优范围为2.0～3.0％)的蛋白酶A，在20～80℃(最优范围为30～50℃)温度下酶解0.5～24小时(最优范围为3～10小时)；酶解结束后用1～6M的NaOH将pH调节至6.0～8.0(最优范围为6.5～7.5)，再加入鹿茸质量0.1～5.0％(w/w)(最优范围为2.0～3.0％)的蛋白酶B，在20～80℃(最优范围为30～50℃)温度下酶解0.5～24小时(最优范围为3～10小时)，反应结束后将温度升至90～100℃(最优范围为95～100℃)并保温10～30分钟后降至室温。

(3)上述酶解液以15000×g～25000×g的速度于4～8℃离心20～30分钟，收集上清液，用截留分子量为5K～20K道尔顿的超滤膜于10000×g～16000×g的速度超滤20～30分钟，收集滤液冷冻干燥，获得具有脯氨酰内切酶抑制活性的组分。

所述蛋白水解酶A为胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种组合；蛋白水解酶B为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或几种组合。蛋白水解酶A和蛋白酶B不能相同。

所制备的活性组分含有LPQPPQE、GPAGPQGPR、LPPLTAD、PPGLPGSPGQ等脯氨酰内切酶抑制肽。

所述具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分，可用于治疗或预防神经性退化性疾病如阿尔兹海默症、帕金森症等认知障碍疾病。

本发明建立了一种具有脯氨酰内切酶抑制活性的鹿茸活性组分的制备方法，所制备的鹿茸PEP抑制肽可应用于阿尔兹海默症等认知障碍疾病的预防和治疗，具有广阔的应用前景。