[发明专利]一种白及胚状体的诱导培养方法

说明书

本发明公开了一种白及胚状体的诱导培养方法，该方法以白及种子为外植体，先培养出未分化出子叶的原球茎，接着对未分化出子叶的原球茎进行培养，获得分裂能力强、颜色为绿色的胚性组织细胞，最后通过对胚性组织细胞的诱导培养获得白及胚状体，为白及优质种苗的大量培育和快速繁殖提供了一条新途径，可有效地解决当前白及植物资源和种苗资源短缺的问题。

技术领域

本发明涉及一种白及胚状体的诱导方法，具体涉及一种白及胚状体的诱导培养方法。

背景技术

中国药典规定的中药白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，具有补肺、消肿、生肌、止血、敛疮等功效，用于治疗肺伤咳血、金疮出血、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皲裂等症。

近年来因白及在治疗止血、消肿生肌以及作为化妆品原材料的应用中具有良好的效果而需求量大增。从20世纪80年代以来，白及已成为药用植物中最具代表性和全局影响力的药用植物资源之一。但白及作为中药材历来以采收野生资源提供药用，目前野生白及已遭到过度采挖，数量急剧减少。又由于白及种子非常细小，在自然条件下很难自主萌发生长，因此急需开展人工繁育和栽培。

目前，已有利用组培技术培养白及种子快速成苗的报道，如专利申请号为201110175931.1的“一种快速繁殖白芨苗的方法”，该方法选择白芨成熟种子作为外植体，将种子消毒后接种至萌发培养基中形成原球茎，切割原球茎使原球茎增殖，然后利用原球茎诱导丛生芽，最后切割丛生芽使其大量繁殖。目前还未见有先将白及种子培养出原球茎胚性细胞后，再进一步由原球茎胚性细胞诱导培养出白及胚状体的报道。白及胚状体具有胚的特性，在条件允许的情况下可快速生长为白及植株，能有效解决白及种苗短缺的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白及胚状体的诱导培养方法，该方法诱导培育出的白及胚状体，在适当的条件下可快速生长为再生植株，从而实现白及植物种苗的快速繁殖。

本发明提供的白及胚状体的诱导培养方法包括如下步骤：

(1)种子的选择及消毒：选取已成熟且果皮已开裂的白及种子，将其进行消毒处理；

(2)原球茎的诱导：将消毒后的白及种子接入半固体培养基1/2MS+6-BA0.1～1.0mg/L+活性炭3.0～5.0g/L+琼脂1.5～3.0g/L中，在培养温度为20～26℃、每天光照10～24小时、光照强度为1500～3000lx的条件下进行原球茎的诱导培养；

(3)原球茎胚性组织细胞培养：选取步骤(2)中未分化出子叶的原球茎，接入固体培养基1/2MS+2iP0.5～2.0mg/L+IAA0.5～1.0mg/L+2,4-D1.0～3.0mg/L中，在培养温度为15～22℃、每天光照6～12小时、光照强度为800～1200lx的条件下进行培养，培养15～25天继代一次，连续进行2次继代培养，获得原球茎胚性组织细胞；

(4)白及胚状体的产生：选取步骤(3)中获得的颜色为绿色的胚性组织细胞，接入固体培养基1/2MS+TDZ1.0～3.0mg/L+NAA0.5～2.0mg/L+酵母提取物100～400mg/L中，在培养温度为22～30℃、每天光照12～24小时、光照强度为2000～3000lx的条件下诱导产生胚状体；

上述所有培养基的蔗糖为20～40g/L、pH值为5.8～6.6；其中固体培养基的琼脂为5.0～6.5g/L。

进一步地，步骤(1)中所述消毒处理是指将白及种子按白及种子:升汞溶液＝1:10的体积比放入0.1％的升汞溶液中消毒7～15分钟，再用无菌水清洗8～15分钟。

进一步地，步骤(2)中所述将消毒后的白及种子接入半固体培养基是指将消毒后的白及种子均匀分散地接入至半固定培养基的中下部，其接种密度为2000～3000粒/L。