[发明专利]可溶性ST2的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及生物检测技术领域，特别涉及一种可溶性ST2的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

随着生活方式的改变及人口老龄化程度的增加，我国心脑血管疾病患者的数量日益增加；心力衰竭(简称心衰)是由于心脏结构或功能异常导致心室充盈或射血能力受损的一组复杂临床综合征，其主要临床表现为呼吸困难和乏力，活动耐量受限，以及液体潴留，肺淤血和外周水肿。心衰为各种心脏疾病的严重和终末阶段，发病率和病死率高，其五年存活率与恶性肿瘤相近，是当今最重要的心血管疾病之一。

目前临床上对心衰管理存在多种困难，如：早期筛查的检测不普及；病人出院以后难以监控；没有固定的出院指南；无法调整用药的种类以及确定用药的剂量；无法评估再入院的风险；无法鉴别最需要治疗的高风险患者。

现代医学研究通过各种生物标志物来实现对心衰的管理；常见的心衰标志物主要包括以下7类：心肌损伤标志物、心肌牵张标志物、心肌纤维化和重构标志物、炎症标志物、氧化应激标志物、神经内分泌激活标志物以及肾功能标志物；其分别反映不同的病理生理过程。

作为心肌纤维化和重构标志物，可溶性生长刺激表达因子((Growth Stimulating Ex-press Gene 2，sST2，或可溶性ST2)在心衰患者管理中的应用越来越受到广泛的关注，《美国心衰指南2013》、《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》中提出可溶性ST2反映心肌纤维化，在急慢性心衰的预测、预后和危险分层中可提供额外信息，是目前临床上最有潜力的、新一代的心衰管理标志物。

综上所述，可溶性ST2检测对心衰患者的临床管理具有重要价值。

目前对可溶性ST2的检测基本上采用双抗体夹心法的免疫学方法进行检测，包括：酶联免疫吸附法(专利：CN106556705A)、胶体金层析法(专利：CN103487586B)、荧光免疫层析法(专利：CN204287196U)、化学发光法(专利：CN106199002A)、免疫比浊(专利：CN106018789A)等。

考虑到临床样本中的可溶性ST2浓度非常低(1ng/mL～200ng/mL)，且存在结构上同源的类似蛋白(如，IL-1受体家族其他蛋白)，因此，可溶性ST2的检测需兼顾灵敏度与特异性；而现有的方法学往往存在特异性或者灵敏度的缺陷。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种ST2的检测方法，该方法包括：用标记物标记可溶性ST2的配体蛋白——白介素-33(interleukin-33，IL-33)及其类似物，作为检测物；同时，将1株或多株抗可溶性ST2的抗体结合到固相载体上。检测时，将待测的样本加入到固相载体上，再加入已做标记的IL-33及其类似物，通过检测标记物的方法来检测待检样品中是否存在可溶性ST2。

应当说明的是：此方法中，可以用标记物标记IL-33及其类似物，而将可溶性ST2抗体结合到固相载体上，然后将待检样品加入到固相载体上，再加入已做标记的IL-33及其类似物，通过检测标记物方法来检测待检样品中是否存在可溶性ST2；同样地，也可以用标记物标记可溶性ST2抗体，而将IL-33及其类似物结合到固相载体上，然后将待检样品加入到固相载体上，再加入已做标记的可溶性ST2抗体，通过检测标记物方法来检测待检样品中是否存在可溶性ST2。

较优地，所述可溶性ST2检测方法中，IL-33及其类似物，应至少含有以下的氨基酸序列：

Gln-Tyr-Xaa-Cys-Leu-Ala-Leu-Asn-Leu-His-Gly-Leu-Arg-Arg-His-Thr-Val-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Asn-Pro-Ser-Lys-Glu-Cys-Phe。

其中，Xaa表示任意的氨基酸。

较优地，所述可溶性ST2检测方法中，所述的IL-33及其类似物，其C末端的氨基酸序

列如下：

Gln-Tyr-Asp-Cys-Leu-Ala-Leu-Asn-Leu-His-Gly-Leu-Arg-Arg-His-Thr-Val-Arg-Leu-Ser-Arg-Lys-Asn-Pro-Ser-Lys-Glu-Cys-Phe。

可想而知的，上述的IL-33及其类似物的偶联有大分子物质，以增强标记效果或是免疫效果。

本领域的普通技术人员应当知道，所述的字母分别代表相应的氨基酸，字母与氨基酸的对应关系为：