[发明专利]用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段

说明书

本发明提供了用于在单个宿主细胞中产生一种或更多种免疫球蛋白样分子的手段和方法。也提供了能够产生目的单特异性和/或双特异性免疫球蛋白样分子的新的CH3突变。

本申请是申请号为201380032190.9的中国专利申请的分案申请，原申请是2013年04月19日提交的PCT国际申请PCT/NL2013/050293于2014年12月18日进入中国国家阶段的申请。

技术领域

本发明涉及分子生物学、医学和生物治疗剂领域。尤其涉及用于治疗多种疾病的治疗性抗体领域。

背景技术

许多目前使用的生物治疗剂是分离的重组人或人源化单克隆抗体，其增强机体免疫系统中和或消除参与疾病过程的细胞和/或分子或者消灭侵入的病原体或感染原的能力。单克隆抗体与抗原的单个特定区域或表位结合，并且对于治疗中的使用，通常根据期望的功能性质进行选择，例如杀死肿瘤细胞，阻断受体-配体相互作用或病毒中和。目前，大约有30种经FDA批准的单克隆抗体，这些单克隆抗体通常被大量生产，并且可详细分析其生物物理和生物化学特性以确保批与批之间的一致性，这有助于控制合格率(regulatoryacceptability)。尽管具有这些有利的特性，但是单克隆抗体也有许多缺点，其中一些涉及到其单特异性的性质和疾病的复杂性。疾病过程在性质上常常是多因素的，并且涉及疾病调节因素的繁多的或协同的作用或不同受体的上调，包括其信号网络之间的串扰(crosstalk)。因此，对参与病理的多种不同因素和途径的阻断可导致改善治疗效果。由于其单特异性的性质，单克隆抗体可能仅干扰复杂疾病过程中的单个步骤，这往往不具有最佳效果。除了不能完全解决疾病过程的多个方面外，已经很清楚的是，靶向单个细胞蛋白质或可溶性蛋白质或病原体的单个表位通常不足以有效地治疗疾病，这是因为对于单克隆抗体来说与之结合并发挥所预期效果的靶表位可能不再可利用。例如，肿瘤细胞经常通过下调、突变或屏蔽存在于生长因子受体上的靶表位来逃避单克隆抗体的治疗。通过激活替选受体和/或其配体，肿瘤细胞然后可开发出不同途径来持续生长和转移。类似地，病毒和其他病原体频繁突变并失去或屏蔽靶表位，从而逃避单克隆抗体的治疗。与单个表位结合的单克隆抗体通常不招募由多克隆抗体诱发的全方位的效应机制，其中包括：调理素作用(增强抗原的吞噬作用)、位阻(包被抗体的抗原被阻止附着到宿主细胞或粘膜表面)、毒素中和、凝集或沉淀(抗体结合多个可溶性抗原引起的聚集和随后的清除)，激活补体和抗体依赖性细胞的细胞毒性(抗体能够通过自然杀伤细胞和嗜中性粒细胞杀伤靶细胞)。

用于治疗应用的多克隆抗体可以从混合人血清中获得。这种血清来源的治疗性多克隆抗体可例如用于治疗或预防由病毒(例如狂犬病病毒、巨细胞病毒和呼吸道合胞体病毒)引起的感染、中和毒素(例如破伤风毒素和肉毒杆菌毒素)或预防Rhesus D同种异体移植物免疫。以下事实阻止了血清来源的多克隆抗体制剂更广泛的应用：来源血浆仅可用于有限范围的靶标，例如感染性疾病和毒素。此外，在数量和适宜性二者方面，产品高度依赖于供体血液的可用性，导致批次之间相当大的差异。此外，筛选技术跟不上不断进化的病毒，因此，免疫球蛋白产品具有传播传染性疾病的潜在风险。最后，血液采集、筛选和免疫球蛋白纯化的漫长过程意味着血浆来源的免疫球蛋白生产昂贵。