[发明专利]一种马属动物卵母细胞玻璃化冷冻保存液、冷冻保存方法和应用

权利要求书

1.一种马属动物卵母细胞玻璃化冷冻保存液，包括基础液(BS)、平衡液(ES) 和玻璃化液(VS) 3种液体，其特征在于，基础液(BS)由体积分数为20%灭活的胎牛血清和体积分数为80%浓度为10mmol/L 的HEPES溶液组成；配制方法为：在无菌环境下，按照体积百分比取灭活的胎牛血清(FBS) 加入HEPES溶液中，并溶解摇匀，制得10ml 基础液(BS)；平衡液(ES)由以下体积百分比的成分组成：8%乙二醇(EG)、4%二甲基亚砜(DMSO)、4%丙二醇(PROH)、 20%灭活的胎牛血清(FBS)、 5%羧化 ε-聚赖氨酸，其余部分为10mmol/L浓度的HEPES溶液；每升平衡液(ES) 还包括0.25mol蔗糖、2g粒径为40nm的羟基磷灰石和0.4g维生素D2；配制方法为：按照体积分数比向HEPES溶液中加入各成分，溶解摇匀后过滤除菌，制得100ml平衡液(ES)， 置于4℃冰箱备用；玻璃化液(VS)由以下体积百分比的成分组成: 16%乙二醇(EG)、8%二甲基亚砜(DMSO)、8%丙二醇( PROH)、20%灭活的胎牛血清(FBS)、10%羧化ε -聚赖氨酸，其余部分为10mmol/L 浓度的HEPES溶液；每升玻璃化液(VS) 还包括0.5mol的蔗糖、3g粒径为40m的羟基磷灰石和0.6g维生素D2；配置方法为：按照体积分数比向HEPES溶液中加入各成分，溶解摇匀后过滤除菌，制得10ml玻璃化液(VS)，置于4℃冰箱备用；

所述玻璃化冷冻保存液的使用方法为:(1)将需要冷冻的卵母细胞或胚胎放于基础液(BS)中清洗1-2 遍;(2)将清洗完毕的所述卵母细胞或胚胎转移至平衡液(ES)中平衡3-7分钟;(3)将平衡过的所述卵母细胞或胚胎迅速转移至玻璃化液(VS)中，再将含有卵母细胞或胚胎的玻璃化液迅速转移至一个封闭式拉长麦管(CPS管)中，并投入液氮在-196℃温度下保存，整个过程在1分钟内完成。

2.根据权利要求1所述的马属动物卵母细胞玻璃化冷冻保存液，其特征在于，所述玻璃化冷冻保存液适用于所有马属动物卵母细胞及胚胎的冷冻保存。