[发明专利]一种适用于三唑磷残留分析的VHH-ELISA试剂盒

权利要求书

1.抗三唑磷纳米抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.分析三唑磷残留的ELISA检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有三唑磷包被抗原，所述试剂包括权利要求1所述纳米抗体、三唑磷标准溶液、酶标记的二抗、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述三唑磷包被抗原为半抗原O-乙基-O-3-(1-苯基-1,2,4-三唑基)-N-(3-羧甲基)硫代磷酰胺酯与牛血清蛋白的偶联复合物，所述包被抗原的制备方法如下：

(1)称7.4mg O-乙基-O-3-(1-苯基-1,2,4-三唑基)-N-(3-羧甲基)硫代磷酰胺酯、2.65mg NHS、4.8mg DCC溶于200μL无水DMF中，室温下搅拌反应过夜；将反应液离心，弃沉淀，上清液为活性酯；

(2)称20mg BSA溶于0.05mol/mL pH9.5的碳酸盐缓冲溶液2mL中，搅拌下逐滴加入150μL上述活性酯，20～30min加完；然后室温下继续搅拌反应4～6h；

(3)反应液装入透析袋内，用0.01mol/L pH7.4的PBS透析；每6～8h换液一次，共换液5～6次；透析后离心，弃沉淀，取上清液作为抗原包被液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔酶标板，包被抗原的包被浓度为285ng/mL。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述纳米抗体的浓度为142ng/mL。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液包括A液和B液，A液由过氧化脲1g、柠檬酸10.3g、Na₂HPO₄·12H₂O 35.8g、吐温-20 100μL和蒸馏水1000mL配制而成，pH值5；B液由四甲基联苯胺700mg、DMSO 40mL、柠檬酸10.3g和蒸馏水1000mL配制而成，pH值2.4。

7.根据权利要求2-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为2M的硫酸液。

8.三唑磷ELISA检测试剂，其有效成分为权利要求1所述纳米抗体。

9.权利要求2-7任一项所述试剂盒或权利要求8所述试剂在ELISA法检测样品中三唑磷残留的应用。