[发明专利]检测UCP1基因突变的PCR-SSCP引物及其在牦牛肉质性状鉴别方法中的应用

说明书

本发明公开了两对用于检测UCP1基因突变的PCR‑SSCP引物对，分别为P5、P6，其正反向引物的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.1‑4；同时还提供了其在牦牛肉质性状预测和鉴别方法中的应用及鉴定方法和相应的试剂盒。本发明的有益效果为：本发明参照普通牛的UCP1基因序列设计引物P5、P6，扩增牦牛UCP1基因，分析UCP1基因检测区域的序列及群体遗传特征，结合甘南牦牛肉生产性能测定数据，分析UCP1基因突变对其胴体及肉质性状的影响，丰富牦牛重要经济性状候选基因分子遗传研究数据，从而预测牦牛的肉质性状，反应灵敏、特异性强、操作简单、精确度高，可进行快速检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及检测UCP1基因突变的PCR-SSCP引物及其在牦牛肉质性状预测和鉴别方法中的应用。

背景技术

牦牛(Bos grunniens)是青藏高原及其毗邻高山、亚高山地区的特有牛种。中国现存栏牦牛1400多万头，占世界牦牛总头数的90％以上，主要在西藏、青海、四川、甘肃、云南和新疆等省(区)的高寒牧区，包括天祝白牦牛、甘南牦牛、九龙牦牛、青海高原牦牛等12个地方品种和1个大通牦牛选育品种。牦牛经过长期自然选择和人工选择，对高寒少氧环境形成了特殊的适应机制，是高寒牧区特色畜产品生产的主体，也是当地牧民重要的生产和生活资源。牦牛一般以肉乳兼用型为选育方面，生产性能全面，但产乳量及屠宰性能均较低。成年牦牛活重142.80kg，屠宰率为47.91％，牦牛肉蛋白质含量高，富含多种矿物质元素和维生素，但肌纤维密度小，牦牛肌肉嫩度低于普通牛肉。如李鹏等报道甘南牦牛肌肉中干物质的含量显著高于黄牛并且肌肉嫩度也低于黄牛。因此，牦牛肉成为具有特色的青藏高原畜产品，但因为牦牛选育程度低，生产性能不高，限制了肉、乳产品的进一步开发利用。

基于牦牛肉品质的特殊性，以及现代生物技术在牦牛遗传育种中的应用现状，利用现代分子育种技术研究牦牛高乳脂的分子遗传特性和达到改善牦牛肉质、提高产肉性能的目的，开发与牦牛产乳性能有关和改善肉品质的候选基因标记，为牦牛重要性状候选基因分子遗传研究积累数据。

胴体性状的研究主要体现在胴体重、净肉率、眼肌面积和屠宰率等方面，目前研究较多的候选基因包括生长激素(GH)、生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子链接蛋白3(IGFBP3)、生肌决定因子(MyoD)基因等。肉质性状的研究主要在肌内脂肪含量(IMF)、大理石花纹、嫩度、系水力等方面，目前研究发现的候选基因有线粒体转录因子A(TFAM)、钙蛋白酶基因(CAPN)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)基因等。Kaplanová等研究发现TFAM基因变异与杂交牛的嫩度、高品质牛肉比率、可分离牛肉脂肪率性状相关。侯冠彧等报道CAPN3基因是影响牛肉质性状的主效应基因或与主效应基因连锁。Barendse等研究表明甲状腺球蛋白(TG)基因的不同基因型显著影响牛肉的大理石评分。郝灵慧等研究发现生长激素(GH)基因第5外显子多态性位点与胴体性状关联性分析表明不同基因型在胴体产肉率、骨肉比性状中差异显著(P0.05)。张春雷等研究阿片黑皮质素前体(POMC)发现该基因多态位点与6月龄体重和平均日增重显著相关，BB型个体显著大于AA型(P0.05)。侯冠彧等研究发现钙蛋白酶3(CAPN3)影响胴体质量并存在显著差(P0.05)。

牦牛胴体性状候选基因的研究与普通牛类似。候选基因主要包括MyoD、A-FABP、ANK1、MSTN基因等。李天科等研究表明GDF-10基因的突变显著影响甘南牦牛的体斜长、体高、胸围、体重。姚玉妮等报道IGF-1基因不同基因型与大通牦牛的体重和体斜长存在显著相关。王丁科等研究表明IGF2基因第8内含子遗传突变发现AA和AB基因型个体质量显著高于BB基因型个体。