[发明专利]一种分离并测定腐殖酸不同极性及分子量组分的方法

权利要求书

1.一种分离并测定腐殖酸不同极性及分子量组分的方法，其主要步骤为：

1)腐殖酸样品预处理：将腐殖酸粉末溶解于磷酸盐缓冲液中，待腐殖酸充分溶解后过0.45μm滤膜，并测定腐殖酸溶液溶解性有机碳(DOC)含量，其中腐殖酸粉末质量为100～150mg，磷酸盐缓冲液体积为20～30mL，浓度为0.2～0.3M，磷酸盐缓冲液的pH＝7；

2)用pH＝7的磷酸盐缓冲液调节腐殖酸溶液DOC至60～120mg/L，移取1mL腐殖酸溶液至棕色液相样品瓶中，装入样品盘，上机待测；

3)高效液相色谱模块搭建：模块包括流动相、二元泵、六通阀、进样器、柱温箱、二极管阵列检测器(DAD)和荧光检测器(FLD)，各模块按顺序搭建，搭建顺序为：流动相—二元泵—六通阀—进样器—装载C18柱的柱温箱—DAD检测器a—FLD检测器a—装载排阻色谱柱的柱温箱—DAD检测器b—FLD检测器b；所述DAD检测器a和DAD检测器b的检测波段200～800nm，FLD检测器a和FLD检测器b设置相同的两个检测波段，即激发波长(Ex)/发射波长(Em)＝270/350～550nm和Ex/Em＝450/350～550nm；

4)流动相配制及测定参数设定：选取乙腈和乙酸铵溶液作为流动相，设置包括样品进样量、流速、柱温、测定时间、测定次数以及流动相体积配比在内的运行参数，并保存测定方法；所述乙腈为色谱纯，乙酸铵浓度为1～3mmol/L，乙腈为流动相A，乙酸铵溶液为流动相B，二者的体积配比为1:15～20；流速为1～2min/L，进样量为50～100μL，样品测定时间为30～60min，测定次数为1～3次；

5)样品测定：编辑样品表，其中第1和2，倒数第1和2号样品均为超纯水，运行程序，实施测定。

2.根据权利要求1所述分离并测定腐殖酸不同极性及分子量组分的方法，其特征在于，所述高效液相色谱模块中，以高效液相色谱仪作为测试装置，所述高效液相色谱仪配备有两个柱温箱、两个DAD以及两个FLD检测器。

3.根据权利要求1所述分离并测定腐殖酸不同极性及分子量组分的方法，其特征在于，所述装载C18柱的柱温箱和装载排阻色谱柱的柱温箱的柱温均控制为25～30℃，所述排阻色谱柱为PL aquagel-OH MIXED-H 8μm色谱柱。

4.根据权利要求1所述分离并测定腐殖酸不同极性及分子量组分的方法，其特征在于，所述步骤5)中，根据样品名称、样品瓶位置、进样次数和测定参数编辑样品表，并按照样品表中的信息，开启样品测定即运行样品表，依据样品特征性紫外/荧光峰出峰时间和位置判定腐殖酸极性及分子量特性；主要的原理是流动相按设定的体积配比和流速在二元泵的作用下依次流过六通阀、柱温箱、色谱柱和检测器，最后流入废液瓶；待测样品则借助进样器注入到已经稳定流动的流动相体系中，由于腐殖酸样品包含不同极性和分子量组分，在样品流经C18柱后不同极性的组分将被分离，其中亲水性较强的组分将优先通过C18柱进入检测器，而疏水性组分则需要较长的时间通过C18柱，进而使腐殖酸赋存的不同极性组分呈现出差异的保留时间，同时由于这些组分具有紫外和荧光特性，当它们经C18柱分离，流入检测器时，被分离组分的紫外和荧光特性将被分别被DAD检测器a和FLD检测器a所识别；当腐殖酸流出检测器，进入排阻色谱柱时，不同分子量组分将被分离，其中大分子量组分优先通过排阻色谱柱，而小分子量组分则需要较长时间通过排阻色谱柱，使不同分子量组分在排阻色谱柱中呈现出差异的保留时间，进而实现了腐殖酸不同分子量组分的分离，而连接在排阻色谱柱后面的DAD检测器b和FLD检测器b能够再次识别不同分子量组分的紫外和荧光特性。