[发明专利]一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测胞内劳森菌的RPA引物，其特征在于，所述RPA引物的核苷酸序列为：

上游引物：5’-AAATCCAAAAGTCGAGTATCTAACTGCGG-3’（SEQ ID NO.1）；

下游引物：5’- TAAAAACCCAGAGCAAAATCGTGATACCAGGCG-3’（SEQ ID NO.2）。

2.根据权利要求1所述的RPA引物，其特征在于，所述上游引物的5’端采用羧基荧光素FAM进行标记，所述下游引物的5’端采用biotin进行标记。

3.权利要求1或2所述的RPA引物在制备检测胞内劳森菌试剂中的应用。

4.含有权利要求1或2所述的RPA引物的试剂盒。

5.权利要求4所述的试剂盒在检测胞内劳森菌中的应用，所述应用不以疾病诊断和/或治疗为目的。

6.一种用于检测胞内劳森菌的RPA方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）引物合成：合成权利要求 1或2所述的RPA引物；

（2）DNA 模板提取：提取待检测样品中的DNA；

（3）RPA扩增反应：以步骤（2）提取的DNA为模板，采用步骤（1）中合成的RPA引物，在RPA反应管中进行RPA扩增反应；

（4）分析RPA扩增产物；

所述的RPA方法不以疾病诊断和/或治疗为目的。

7.根据权利要求6所述的RPA方法，其特征在于，所述RPA扩增反应体系以50μl计为：

模板DNA 2.0 μl

上游引物 2.0μl

下游引物 2.0μl

水化缓冲液 29.5μl

醋酸镁 2.5 μl

无核酸酶纯水 12μl

其中，上游引物和下游引物的初始浓度均为13nM，所述醋酸镁的初始浓度为280mM。

8.根据权利要求6所述的RPA方法，其特征在于，步骤（4）中分析RPA扩增产物的方法为：将RPA扩增产物稀释，然后用胶体金侧向流免疫层析试纸条对稀释后的RPA扩增产物进行检测。

9.根据权利要求8所述的RPA方法，其特征在于，所述胶体金侧向流免疫层析试纸条中的有色颗粒是纳米金颗粒，所述纳米金颗粒采用链霉亲和素包被。

10.根据权利要求8所述的RPA方法，其特征在于，所述胶体金侧向流免疫层析试纸条上设有抗羧基荧光素抗体检测线和生物素化抗体质控线；若胶体金侧向流免疫层析试纸条的抗羧基荧光素抗体检测线出现条带，而且生物素化抗体质控线正常，则表明该样品中含有胞内劳森菌，若仅是生物素化抗体质控线上出现条带，则表明该样品中不含胞内劳森菌。