[发明专利]一种ChOx‑ChE/GQDs/N‑F‑TNs光电化学生物传感器制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及电化学分析技术领域，具体的涉及一种ChOx-ChE/GQDs/N-F-TNs光电化学生物传感器制备方法及其应用.

背景技术

胆固醇又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物。胆固醇在动物体内含量较多，特别是在神经组织和大脑中最丰富，在肾、肝、胆汁、皮肤和脾中的含量也较高。胆固醇的溶解性与脂肪相类似，不溶于水，易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂。对于人类而言，体内的总胆固醇主要由游离胆固醇和酯化胆固醇两种形式组成，血清中正常胆固醇浓度范围是140-190mg/dL。当血清中胆固醇浓度过高时，会引起动脉粥样硬化、心脏病、糖尿病等疾病，因此测定血清中胆固醇含量己成为临床诊断中的一项重要参考指标。

齐墩果酸(oleanolic acid.简称OA)，又名庆四紊，五环三萜类化合物，为白色结晶性粉末，无臭、无味。对酸碱不稳定，难溶于水，可溶于乙醚、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇等。齐墩果酸广泛地存在于食物、医学草本植物和其他植物中。1975年，我国湖南医药工业研究所按1974年云南青叶胆疗效鉴定会的分工，进行了青叶胆抗肝炎有效成分的化学和药理研究，鉴定其中一单体为OA。据不完全统计，有126种植物含有OA。在常用的植物中，如丁香、太枣、川西獐牙菜、女贞子、牛膝、西洋参、苏合香、连翘、青叶胆、琵琶叶、柿叶、景天三七、人参、山芝麻、甘草、关木通、东北龙胆、雪胆、丰忽木、小茴香、夏枯草中都含有OA。OA在五加科、葫芦科、铁青树科、毛茛科等植物的根和根茎(如雪胆、忽木)中主要以皂苷形式存在。在木樨科、龙胆科、茜草科、苋科、毛茛科等植物的叶和果中(如女贞子)，主要以游离形式存在。OA的药理作用不断被发现且逐渐深入，因而引起了广泛关注。经口灌胃给予OA可降低正常大鼠和高脂血症大鼠血清中甘油三酯、胆固醇和β脂蛋白含量旧。它还可以提高老龄小鼠血小板泳动速率，它将为改善老年人血小板的流动性、降低血液牯度、防治老年人的血栓疾病和动脉粥样硬化提供部分实验依据。

此外，山绿茶胶囊为单味药制剂，主要用于防治高血压症、降血酯、降胆固醇、口腔炎、慢性喉炎、妇科附件炎等症。芦丁为山绿茶的主要成分之一，芦丁具有较强的药理活性。因此研究芦丁和齐墩果酸对胆固醇的生理活性具有一定的社会意义。

目前临床检测胆固醇的方法主要有比色法、电化学法、气液色谱-质谱联用法、温度测定法、分子发光法和发光标记法等，其中比色法是目前使用最广泛的方法，其测试结果稳定可靠，但有需要样品剂量较多、速度慢、需要专业人员操作等缺点，而电化学法因其具有灵敏、迅速、简便等优点正在被越来越多的用户所接受。

发明内容

本发明的目的在于，针对现有技术中存在的上述问题，提供一种ChOx-ChE/GQDs/N-F-TNs光电化学生物传感器制备方法及其应用，能够在可见光激发下产生光电流，以胆固醇(CHO)作为底物，经ChOx-ChE催化水解所得的Ch和CE能够捕获光生空穴抑制光生空穴与光生电子的复合，从而提高了光电流。可对ChOx-ChE酶活性损伤进行研究；可用于检测芦丁和齐墩果酸对胆固醇氧化酶活性的影响，为解决胆固醇过高导致疾病的研究治疗方法及酶生物传感技术方面提供了重要依据。

为实现上述目的，达到上述效果，本发明是通过以下技术方案实现：

一种ChOx-ChE/GQDs/N-F-TNs光电化学生物传感器制备方法，其特征在于包括：

1)用电化学阳极氧化法制备N/F/TiO₂NTs电极

钛片经打磨光洁，依次用丙酮、无水乙醇、去离子水超声清洗，以氢氟酸和硝酸的混合液浸润后用丙酮和去离子水冲洗，氮气氛下干燥，然后，以石墨电极为阴极，钛片为阳极，外加电压20V，以含有NH₄F的(NH₄)₂SO₄溶液为电解质，在电化学反应器中反应，经煅烧制得N/F/TiO₂NTs电极；

2)用高温裂解法制备GQDs并修饰N-F-TNs电极

将N/F/TiO₂NTs电极浸入含有GQDs溶液中，浸泡10min，用二次蒸馏水冲洗，室温晾干，GQDs被修饰在N/F/TiO₂NTs修饰电极表面，制得GQDs/N-F-TNs电极；

3)用交联法构建ChOx-ChE/GQDs/N-F-TNs光电化学生物传感器