[发明专利]一种重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型及建立方法

说明书

本发明属于医疗领域，公开了一种重组Gal‑1过敏环境免疫耐受诱导模型及建立方法，诱导模型能诱导出抗原特异性调节性T细胞，恢复病人体内的抗原特异性免疫耐受，从而抑制过敏反应；过敏反应环境下，体内TNF‑α含量增加，抑制Gal‑1的表达，应用抗TNF‑α抗体提高Gal‑1；Gal‑1促使LLPC分化为Breg，联合应用抗TNF‑α抗体，SIT和Gal‑1，促进抗原特异性免疫耐受的恢复。

技术领域

本发明属于医疗领域，尤其涉及一种重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型及建立方法。

背景技术

免疫耐受是指机体免疫系统接受某种抗原作用后产生的特异性的免疫无应答状态。对特异性抗原产生免疫耐受的个体，再次接触该抗原刺激后，不发生免疫应答或不能发生用常规方法可检测到免疫应答。因此正常的免疫耐受机制对维持机体健康至关重要。目前对免疫耐受产生的机制还不十分明了。虽然近年来国际上和国内对损害免疫耐受的因素研究进展很快，但对于使已经形成的免疫耐受损伤的恢复及其导致的疾病的康复还远不能令人满意。动物实验和临床研究表明，免疫耐受失常和多种疾病的发病有关，例如过敏性疾病(如哮喘、食物过敏)，自身免疫性疾病(如糖尿病、系统性红斑狼疮)以及某些非特异性炎症病(如炎症性肠病)等。这些疾病的发病人数众多，每年治疗这些疾病的医疗费用耗资巨大。因此，由于免疫耐受失常而引起的疾病对人类的健康和社会经济有重大的负面影响。Gal-1是凝集素家族成员之一。凝集素(Lectins)是一类非抗体、对糖蛋白上的糖类具有高度特异性的结合蛋白；具有凝集细胞和沉淀聚糖的作用。在哺乳动物体内已发现15种Gal亚型。由于免疫细胞表面富含糖蛋白，Gal-1能通过和糖蛋白(例如T细胞受体，CD45，CD43，CD7，CD3，CD2，前B细胞受体等)结合而调节免疫细胞的功能。研究表明，Gal-1能调节DC的活性，增强IL-10的表达，引起T细胞凋亡，使Treg活化，为Treg的免疫抑制功能所必需，调节B细胞的生命周期，诱导长寿浆母细胞(LLPC)表达免疫耐受分子TGF-β。哮喘病人体内Gal-1的水平下降；结肠炎小鼠肠粘膜中Gal-1显著减少。食物过敏小鼠的免疫细胞Gal-1含量显著降低，并和血清TNF-α水平呈负相关关系(p0.01)；哮喘病人和慢性结肠炎也有这些现象。TNF-α可以抑制Gal-1在免疫细胞中表达。受Gal-1作用后，IEC可表达TGF-β，对微生物产物引起的炎症反应(如分泌IL-8)也明显降低。从理论上讲，任何外来抗原进入人体后都可以诱导产生免疫耐受。但是在已经患有过敏性疾病的病人却很困难。这是由于特异性抗原进入病人体内即可诱发过敏反应，同时抑制了免疫耐受的产生。

综上所述，现有技术存在的问题是：由于免疫耐受失常而引起的疾病对人类的健康和社会经济有重大的负面影响，疗效不佳；在免疫耐受失常的个体中恢复抗原特异性免疫耐受却比较困难；无法确定三联剂是否在体内也能促使抗原特异性LLPC分化为抗原特异性Breg以及三联剂中的Gal-1，SIT和抗TNF-α抗体的组合与比例和促使失常的肠粘膜免疫耐受恢复的相关性。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型及建立方法。

本发明是这样实现的，一种重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型，所述重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型为：应用Gal-1抑制肥大细胞反应的特性，让过敏原对肥大细胞不起激活作用，而只诱导抗原特异性免疫耐受细胞产生。这些免疫耐受细胞产生后，清除抗原特异性T细胞和B细胞；从而使过敏性疾病终止。

本发明的另一目的在于提供一种所述重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型的建立方法，所述重组Gal-1过敏环境免疫耐受诱导模型的建立方法包括以下步骤：

步骤一，用OVA和霍乱毒素灌胃，建立OVA抗原建立食物过敏模型；

步骤二，小鼠用三联剂治疗(5μg/只/天)；疗程两周；

步骤三，处死小鼠，从肠组织中分离单个核细胞；用流式细胞术检测其中的TGF-β+DC，TGF-β+BC，TGF-β+Treg；