[发明专利]一种Gal‑1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗领域，尤其涉及一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法。

背景技术

免疫耐受是指机体免疫系统接受某种抗原作用后产生的特异性的免疫无应答状态。对特异性抗原产生免疫耐受的个体，再次接触该抗原刺激后，不发生免疫应答或不能发生用常规方法可检测到免疫应答。因此正常的免疫耐受机制对维持机体健康至关重要。目前对免疫耐受产生的机制还不十分明了。虽然近年来国际上和国内对损害免疫耐受的因素研究进展很快，但对于使已经形成的免疫耐受损伤的恢复及其导致的疾病的康复还远不能令人满意。动物实验和临床研究表明，免疫耐受失常和多种疾病的发病有关，例如过敏性疾病(如哮喘、食物过敏)，自身免疫性疾病(如糖尿病、系统性红斑狼疮)以及某些非特异性炎症病(如炎症性肠病)等。这些疾病的发病人数众多，每年治疗这些疾病的医疗费用耗资巨大。因此，由于免疫耐受失常而引起的疾病对人类的健康和社会经济有重大的负面影响。Gal-1是凝集素家族成员之一。凝集素(Lectins) 是一类非抗体、对糖蛋白上的糖类具有高度特异性的结合蛋白；具有凝集细胞和沉淀聚糖的作用。在哺乳动物体内已发现15种Gal亚型。由于免疫细胞表面富含糖蛋白，Gal-1能通过和糖蛋白(例如T细胞受体，CD45，CD43，CD7， CD3，CD2，前B细胞受体等)结合而调节免疫细胞的功能。研究表明，Gal-1能调节DC的活性，增强IL-10的表达，引起T细胞凋亡，使Treg活化，为 Treg的免疫抑制功能所必需，调节B细胞的生命周期，诱导长寿浆母细胞(LLPC) 表达免疫耐受分子TGF-β。哮喘病人体内Gal-1的水平下降；结肠炎小鼠肠粘膜中Gal-1显著减少。食物过敏小鼠的免疫细胞Gal-1含量显著降低，并和血清TNF-α水平呈负相关关系(p<0.01)；哮喘病人和慢性结肠炎也有这些现象。TNF-α可以抑制Gal-1在免疫细胞中表达。受Gal-1作用后，IEC可表达 TGF-β，对微生物产物引起的炎症反应(如分泌IL-8)也明显降低。

综上所述，现有技术存在的问题是：在脱敏治疗中，注射少量抗原试图使过敏病人产生免疫耐受；但抗原进入人体后激活了肥大细胞，释放过敏介质，抑制了免疫耐受成分的产生；因而治疗效果不佳，或产生不了治疗效果。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型及建立方法。

本发明是这样实现的，一种Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型，所述Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型为：Gal-1和肥大细胞表面的IgE 高亲和力受体结合，阻断特异性抗原和肥大细胞膜上的IgE高亲和力受体结合；使肥大细胞稳定，不释放过敏性介质；进入体内的特异性抗原即获得机会诱导、产生抗原特异性免疫调节细胞，使机体恢复或重建抗原特异性免疫耐受；从而抑制抗原特异性Th2反应，产生永久性的治疗效果。

本发明的另一目的在于提供一种所述Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的构建方法，所述构建方法包括：

步骤一，一部分Gal-1缺陷小鼠用Gal-1腹腔注射，每日一次，共7天；分别从Gal-1缺陷小鼠，B6小鼠和用Gal-1注射过的小鼠取小肠，装于Ussing室系统上；

步骤二，用OVA为抗原建立免疫耐受；OVA 1mg/只灌胃，每天一次，共 7天。

步骤三，建立食物过敏动物模型，测定速发性食物过敏的有关指标和迟发性肠过敏有关指标；

步骤四，测定免疫耐受有关指标，包括肠粘膜耐受型DC，Treg，耐受型B 细胞计数和免疫耐受分子的测定。

进一步，所述步骤一中Gal-1腹腔注射0.25mg/只。

进一步，所述食物过敏动物模型从5周，致敏小鼠坐或/和Gal-1处理；治疗1周后，用特异性抗原OVA致小鼠免疫，第二天处死小鼠，观察肠道过敏反应。

本发明的优点及积极效果为：本发明的模型能诱导出抗原特异性调节性T 细胞，恢复病人体内的抗原特异性免疫耐受，从而抑制过敏反应；表明Gal-1有免疫调节功能；肠粘膜是形成口服耐受的重要器官；本发明进一步观察Gal-1对肠粘膜的免疫耐受特性的调节；并且从观察IEC在诱导和维持肠粘膜免疫耐受中的作用这一全新的切入点着手，揭示IEC在免疫耐受方面的功能，揭示肠粘膜诱导免疫耐受的内在机制。

附图说明

图1是本发明实施提供的Gal-1在诱导免疫耐受中的作用观察的模型的建立方法流程图。