[发明专利]一种MSCs来源的OPCs滋养感觉神经元轴突生长的方法

说明书

本发明公开了一种MSCs来源的OPCs滋养感觉神经元轴突生长的方法，包括如下步骤：S1.以新生儿脐带华通氏胶经MSCs培养基培养得到P2代脐带MSCs；S2.以MSCs培养基悬浮P2代脐带MSCs，接种至重组人层黏连蛋白和重组人玻连蛋白包被的细胞培养板中培养至60‑70%汇合，换神经分化培养基制备得到神经上皮预诱导细胞；S3.以神经上皮预诱导细胞经OPCs培养基培养得到P0代OPCs，并传代培养至P2代；S4.以P2代OPCs制备OPCs滋养层；S5.制备DRG感觉神经元细胞，以OPCs滋养层与DRG感觉神经元细胞进行共培养。本发明提出的MSCs来源的OPCs滋养感觉神经元轴突生长的方法，为中枢神经系统神经损伤修复的细胞治疗提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体来说，涉及一种MSCs来源的OPCs滋养感觉神经元轴突生长的方法。

背景技术

神经系统退行性改变和损伤后再生修复与功能重建，一直是神经科学研究者亟待探索解决的重大课题及面临的最难以逾越的严峻挑战。由于中枢神经组织在结构上的脆弱性和功能上的复杂性，其损伤往往息味着巨大的、不可逆的破坏，严重影响患者生命安全与生活质量。神经系统损伤修复包括结构修复和功能恢复两个方面。结构修复涵盖神经元再生和新生、轴突生长和突触再连接。目前的医疗技术尚不能解决神经元再生和新生的难题，而轴突生长则是可控的一个方面。既往的研究表明，截瘫大鼠5%的残留神经纤维即可使瘫痪后肢恢复部分或全部关节运动；当残留达到10%时，截瘫动物甚至可以恢复部分行走功能；当残留比例超过40%时，大鼠后肢运动功能可达到正常。有理由推测，人类神经系统（脑和脊髓）退行性改变或损失只要10%~15%神经结构完整，即可保持近85%~90%功能，而如何促进神经纤维新生是恢复神经功能、改善生活质量的重要内容。

目前，应用于临床治疗的药物大多起神经保护作用和（或）可能的神经修复作用，包括：神经节苷脂、脑蛋白水解物、三磷酸胞苷二钠、奥拉西坦等神经营养药物，硫酸软骨素、软骨素酶ABC等减弱抑制神经生长的药物，司来吉兰、肌酸、艾地苯醌等代谢药物，拉莫三嗪、利鲁唑等抗兴奋毒性药物，美金刚、瑞波西汀、利他林、他克林等神经递质性药物，但这些药物对轴突再生和新生以及神经功能恢复的作用极其有限。研究新的神经修复制剂或药物成为神经修复医学的重要课题。

针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种MSCs来源的OPCs滋养感觉神经元轴突生长的方法，为中枢神经系统神经损伤修复的细胞治疗提供了新的思路。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种MSCs来源的OPCs滋养感觉神经元轴突生长的方法，包括如下步骤：

S1.以新生儿脐带华通氏胶经MSCs培养基培养得到P2代脐带MSCs；

S2.以MSCs培养基悬浮P2代脐带MSCs，接种至重组人层黏连蛋白和重组人玻连蛋白包被的细胞培养板中培养至60-70%汇合，换神经分化培养基制备得到神经上皮预诱导细胞；

S3.以神经上皮预诱导细胞经OPCs培养基培养得到P0代OPCs，并传代培养至P2代；

S4.以P2代OPCs制备OPCs滋养层;

S5.制备DRG感觉神经元细胞，以OPCs滋养层与DRG感觉神经元细胞进行共培养。

进一步地，所述MSCs培养基为含2% 血清替代物的无血清培养基。

进一步地，所述神经分化培养基为包含以下成分的DMEM/F12：

1×B27，

1×N2，

1uM 1,25-二羟维生素D3，