[发明专利]一种组蛋白免疫共沉淀（ChIP）试剂配方在审
| 申请号： | 201710660025.8 | 申请日： | 2017-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN109387623A | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 李旦 | 申请（专利权）人： | 苏州同因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531;G01N33/543 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215500 江苏省苏州市常熟高新技*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 组蛋白 免疫共沉淀 试剂配方 实例研究 基因型 配方 检测 保证 | ||
1.一种组蛋白免疫共沉淀(ChIP)试剂配方，其特征在于，包含以下内容：
(1)进行蛋白-DNA交联和裂解细胞：用终浓度为1％甲醛溶液固定总数为1×107的K562细胞，室温下放置10min，甘氨酸溶液中止反应；用预冷的PBS洗涤细胞两次，离心去上清后加入1ml含蛋白酶抑制剂的SDS裂解液裂解细胞；
(2)超声断裂染色质：按优化好的条件(100W，每次超声10s，共5次，间隔30s)断裂细胞裂解液中的染色质，4℃下离心后保留上清；
(3)免疫共沉淀：超声处理后的溶液中加入蛋白G-琼脂糖小珠进行预清除，离心后吸取1％(v/v)上清留作Input溶液在剩余的上清中加入免疫共沉淀抗体，包括阳性对照抗体(anti-RNA Polymerase II，1.0μg/管)、阴性对照抗体(normal mouse Ig G，1.0μg/管)和目的抗体(依抗体说明书推荐量：抗ac H3抗体10μg/管，抗ac H4抗体3μg/管)，在4℃摇床上孵育过夜，次日溶液中加入蛋白G-琼脂糖小珠吸附免疫沉淀复合物，短暂离心后去上清，顺次用低盐、高盐、氯化锂和TE缓冲液清洗蛋白G-琼脂糖小珠；
(4)免疫沉淀复合物洗脱：用洗脱缓冲液洗脱免疫沉淀复合物，同时在装有Input溶液的管中加入相同体积的洗脱缓冲液；
(5)蛋白-DNA结合物解交联，释放DNA：加入5mol/L Na Cl溶液，65℃水浴孵育4-5h或过夜；
(6)用DNA纯化柱回收DNA。
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