[发明专利]乌司他丁融合蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种乌司他丁融合蛋白及其制备方法与应用。所述乌司他丁融合蛋白的结构为UTI‑rHSA所示；其中，UTI为乌司他丁，或其部分片段、突变体和缺失体；rHSA为人血白蛋白，或其部分片段、突变体和缺失体。该融合蛋白生物效价好，且具有更长的半衰期，且蛋白序列本身来源于人体，无免疫原性，安全性高。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种乌司他丁融合蛋白及其制备方法与应用。

背景技术

乌司他丁是含有两个kunitz型结构域的单链糖蛋白，是重要的尿胰蛋白酶抑制剂(urinary trypsin inhibitor，UTI)。在人体细胞中，UTI是由a-microglobulin precursor(AMBP)基因编码，含有10个外显子和9个内含子。成熟的基因编码产物含有147个氨基酸。乌司他丁对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、白细胞弹力蛋白酶、纤溶酶等在内的多种蛋白酶具有较强的抑制作用。此外UTI还在抗炎、抗休克、抑制肿瘤细胞转移等方面起作用。

乌司他丁最初是从人尿中提取获得。从人尿中来源的乌司他丁含有共价结合的硫酸软骨素分子，并且高度糖基化。最初人们认为共价结合的硫酸软骨素以及糖基化对乌司他丁的生物活性至关重要，然而德国Bayer Altiengsellschaft公司证明糖基化并非UTI活性所必需。而后的研究表明，利用大肠杆菌(E.coli)表达的重组乌司他丁也同样具有对胰蛋白酶的抑制作用。由于利用基因工程技术表达重组蛋白可以避免从尿液中提取蛋白存在的来源限制、样品污染、后提取工艺复杂等，目前已成为获得乌司他丁的最佳途径。然而，目前利用基因工程手段从E.coli等微生物中获得的重组乌司他丁产量仍然低，难以满足商业化要求。

此外，根据文献报道，自人尿提取的乌司他丁给健康正常男性30万单位/10ml静脉注射给药后，3小时内血药浓度直线下降，清除半衰期为40分钟；给药后6小时给药量的24％从尿中排泄。研制长效的乌司他丁可以降低给药剂量、减少给药次数，具有良好的临床应用效益。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明目的在于提供一种乌司他丁融合蛋白，并提供了其制备与应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种乌司他丁融合蛋白，其结构为UTI-rHSA所示；

其中，UTI为乌司他丁，或其部分片段、突变体和缺失体；

rHSA为人血白蛋白，或其部分片段、突变体和缺失体。

1909年，Beuer和Berich首次报道了尿液中存在蛋白酶抑制剂(urinary trypsininhibitor，UTI)，现在也多称之为乌司他丁(ulinastatin)，其在治疗急性胰腺炎、辅助治疗休克、改善手术预后尤其是减少体外循环并发症等方面有重要的作用，加上其本身来源于人体，无免疫原性，安全性高。

本发明所提供的乌司他丁融合蛋白，生物效价好，且具有更长的半衰期，且蛋白序列本身来源于人体，无免疫原性，安全性高。

其中，“部分片段、突变体和缺失体”的选择为仍具有UTI或rHSA活性的多肽片段，其选择方式为本领域技术人员所熟知。

优选的，如上所述的乌司他丁融合蛋白，所述UTI的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

优选的，如上所述的乌司他丁融合蛋白，所述rHSA的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

优选的，如上所述的乌司他丁融合蛋白，所述UTI与所述rHSA还包括Linker；