[发明专利]一种采用气相色谱‑质谱法测定奶粉中3‑氯丙醇酯含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及氯丙醇酯的测定方法，特别是一种采用气相色谱-质谱法测定奶粉中3-氯丙醇酯含量的方法。

背景技术

目前，氯丙醇类化合物是公认的食品污染物，具有生殖、肾脏和神经毒性以及潜在致癌作用。氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）在生物体内脂肪酶的作用下分解成氯丙醇，是近年来发现的一类新型食品污染物，在油和含油食品中的污染水平较高。其中3-氯-1,2丙二醇（3-MCPD）脂肪酸酯（简称3-MCPD酯）毒性最强、最典型、污染水平最高，因此备受关注。

由于氯丙醇酯的食品安全问题发现时间不长，且主要发现于精炼植物油中，因此有关食品中氯丙醇酯的报道不多，检测的样品也以食用油最为常见，有关其他食品基质中氯丙醇酯的报道较少。由于棕榈油在奶粉中广泛使用，国际上已有奶粉中检测出氯丙醇酯的相关文献发表，目前相关检测方法未见公开。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用气相色谱-质谱法测定奶粉中3-氯丙醇酯含量的方法。

本发明的目的是通过如下途径实现的：一种采用气相色谱-质谱法测定奶粉中3-氯丙醇酯含量的方法，其测定步骤如下：

A.样品预处理：

a.称取4g奶粉样品至100mL具塞玻璃试管中，加入20mL预先准备好的65℃热水，搅匀后冷却至室温;

b.向冷却后的样品溶液中加入8mL氨水，盖塞后涡旋混匀，加入65℃水域中加热30min；

c.向试管中加入10mL乙醇，混合摇匀后加入25mL乙醚，涡旋1min后加入25mL石油醚，继续涡旋30s;

d.静置30min，待其完全分层后，取上层溶液倒入预先称重的蒸发皿;

e.再加入15mL乙醚和15mL石油醚，重复提取2次，将上层液一并转移至蒸发皿中;

f.将蒸发皿放于65℃水浴，加热去除溶剂，擦去蒸发皿外壁水分，冷却至室温后称重，前后2次差值即为脂肪的重量,将提取的脂肪置于4℃冰箱中保存；

B.样品水解与净化：

a.称取0.1g脂肪，加入10mg/L的d5-3-氯-1，2-丙二醇棕榈酸单酯内标使用液60μL和甲基叔丁基醚-乙酸乙酯（8∶2，V/V）500μL，涡旋混匀;

b.加入1mL甲醇钠/甲醇溶液（0.25mol/L），涡旋混匀，反应4min，加入100μL冰乙酸，涡旋混匀，再加入3mL20%的氯化钠溶液和3mL正己烷，涡旋1min，弃去上层溶液;

c.加入3mL正己烷重复萃取1次，将下层水相溶液转入ChemElutTM硅藻土小柱中，平衡静置5min;

d.加入30mL正己烷淋洗弃去，再用80mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液旋转蒸发近干，用2mL正己烷复解残渣;

C.标准溶液的配制:

a.称取3-氯-1,2丙二醇（3-MCPD）、d5-3-氯-1,2丙二醇（d5-3-MCPD）、3-氯-1，2-丙二醇棕榈酸单酯（3-MCPD-P）、d5-3-氯-1，2-丙二醇棕榈酸单酯（d5-3-MCPD-P）各10 mg，置于10mL棕色容量瓶中，以乙酸乙酯溶剂定容至刻度，分别制备浓度为1000mg/L的标准储备液，保存于-20℃冰箱中；

b.将各标准储备液再用正己烷逐级稀释，配制成浓度为10.0mg/L的标准使用液;

D.样品衍生化:

a.用气密针迅速加入七氟丁酰基咪唑50μL，立即密塞,漩涡充分混合后，于75℃烘箱保温30 min,取出后，放至室温并加20%饱和氯化钠溶液2mL，涡旋混合，静置使两相分离;

b.移取上层溶液到预先加有少许无水硫酸钠的2mL样品瓶中，放置1min，将样品液转移至另一2mL样品瓶中待测；

E.测定条件和结果计算

色谱条件：色谱柱：DB-5（30m×0.25mm×0.25μm）；柱流量：1.0mL/min；柱压力：20psi；程序升温50℃保持1min，2℃/min升至90℃，再40℃/min升至250℃，保持5min；进样口温度：250℃；不分流进样，进样体积1μL;

质谱条件：传输线温度：280℃；离子源温度：230℃；EI电压：70eV；溶剂延迟5min；以M/Z 253作为3-氯丙醇的定量离子，以M/Z 257作为d5-3-氯丙醇的定量离子，按内标法计算结果;

F.结果判定