[发明专利]生菜作为宿主在表达凝血因子中的应用有效
| 申请号： | 201710667754.6 | 申请日： | 2017-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN109385443B | 公开（公告）日： | 2022-08-02 |
| 发明（设计）人： | 王跃驹;马洁 | 申请（专利权）人： | 北京睿诚海汇健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/12;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 张柳;赵青朵 |
| 地址： | 102104 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生菜 作为 宿主 表达 凝血 因子 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种生菜作为宿主表达凝血因子的方法，其特征在于，将表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入生菜组织后，提取、分离蛋白质，获得凝血因子；
所述凝血因子为人凝血八因子；
所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：
步骤1：抽真空25～45s；
步骤2：保持真空-95kPa压力30～60s；
步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；
重复上述步骤2～3次，避光处理4d；
所述表达载体，包括凝血因子的核苷酸序列和双元植物载体；
所述凝血因子为人凝血八因子；
其构建方法包括如下步骤：
步骤1：在凝血因子的核苷酸序列的5’末端分别加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端分别加入Sacl限制性酶切位点；
步骤2：克隆到载体pUC57载体中，获得克隆载体pUC57-FVIII；
步骤3：通过Xbal/Sacl从步骤2所得的克隆载体pUC57-FVIII中获得基因片段FVIII，克隆至双元植物载体pCam35S，获得表达载体p35S-FVIII；
所述人凝血八因子的密码子优化后的FVIII cDNA序列如SEQ ID No.3所示。
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