[发明专利]一种利用色谱-3和动态轴向压缩柱色谱法纯化制备高纯度鹅去氧胆酸的方法

权利要求书

1.一种利用色谱-3柱色谱和动态轴向压缩柱色谱两步法纯化制备高纯度鹅去氧胆酸的方法，其特征在于：步骤为：

将待纯化处理的低含量的CDCA样品溶液用装填聚苯乙烯/二乙烯基苯型色谱填料的色谱-3柱色谱分离纯化，获得CDCA粗品，然后将CDCA粗品动态轴向压缩柱色谱分离纯化，获得高纯度CDCA；

其中：所述的色谱-3柱色谱分离纯化步骤为：将色谱-3柱预处理，吸附剂即色谱填料装柱，将待纯化的低含量CDCA样品上样于色谱-3柱中，用洗脱剂洗脱浓缩，得到CDCA粗品；

所述的动态轴向压缩柱色谱分离纯化步骤为：将动态轴向压缩柱装填填料，系统平衡，然后将上述色谱-3柱色谱分离纯化后的CDCA粗品配成样品溶液注入平衡后的动态轴向压缩柱，洗脱，浓缩获得CDCA成品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述色谱分离纯化工艺中待纯化处理的低含量的CDCA样品用30％-80％的乙醇将CDCA配成50-90mg/ml的样品溶液；所述CDCA样品可选自初级加工的CDCA含量15-20％的鹅去氧胆酸。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述色谱分离纯化工艺中将为待分离的CDCA样品量5-20倍量的色谱-3吸附剂聚苯乙烯/二乙烯基苯型色谱填料采用湿法上柱。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：色谱-3柱采用95％乙醇膨胀24小时；再用水洗至无浑浊；40％乙醇洗脱5–6BV；

所用色谱分离纯化工艺中色谱-3柱柱尺寸为直径2cm*20cm；

所述的色谱分离纯化工艺中的浓缩为：将洗脱收集到的含鹅去氧胆酸单体溶液合并减压浓缩，至出现大量白色固体，抽滤，干燥，即得鹅去氧胆酸成品。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的色谱分离纯化工艺中：先用30％-45％乙醇洗脱，去掉杂质，再用47％-60％的乙醇洗脱，洗脱色谱-3柱上吸附的CDCA样品，洗脱过程中用硅胶TLC检测分离情况，当TLC检测到收集到的样品基本为CDCA时，开始收集样品，然后当TLC检测到鹅去氧胆酸含量极微时，洗脱结束。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的动态轴向压缩柱色谱分离纯化工艺为：

将200～800目硅胶填料用流动相匀浆得到匀浆液，将匀浆液送入动态轴向压缩柱，排出流动相后压实色谱填料，完成动态轴向压缩柱的装填；用流动相冲洗装填后的动态轴向压缩柱，持续一段时间，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，达到平衡状态；

将上述色谱-3柱色谱分离纯化后的CDCA粗品配成样品溶液注入平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱，收集样品，浓缩，得到CDCA粗品；

CDCA粗品样品溶液的浓度为0.2-0.8g/ml；所述的流动相为石油醚、乙酸乙酯、甲酸按照体积比例9:5:0.6-13:5:0.6组成的混合液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的CDCA粗品用流动相溶解超声后过滤，将滤液用流动相稀释成样品溶液。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的动态轴向压缩柱色谱分离纯化工艺洗脱过程中用硅胶TLC检测样品分离情况，收集含鹅去氧胆酸部分，当TLC检测到鹅去氧胆酸含量极微时，洗脱结束。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的动态轴向压缩柱尺寸为直径50cm*250cm；

所述的动态轴向压缩柱色谱分离纯化工艺中浓缩为将洗脱收集到的鹅去氧胆酸单体溶液合并减压浓缩，至出现大量白色固体，抽滤，干燥，即得鹅去氧胆酸成品。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述第一步色谱分离纯化工艺获得的鹅去氧胆酸粗品纯度为70-80％；最后得到的CDCA成品纯度大于97％，收率大于90％。