[发明专利]微藻硫酸酯化复合多糖及其制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种微藻硫酸酯化复合多糖，由硫酸酯化小球藻多糖：硫酸酯化螺旋藻多糖按1:16‑‑16:1比例混合构成。本发明微藻硫酸酯化复合多糖能有效的抑制肿瘤细胞的体外增殖，并由于具有很好的水溶性，故能在体内发挥作用，能很好的抑制肿瘤的生长。

技术领域

本发明属于海洋生物的医疗应用领域，涉及螺旋藻及小球藻，尤其是一种微藻硫酸酯化复合多糖及其制备方法及其应用。

背景技术

微藻的生长条件和环境特点决定了其胞内多糖具有一些有别于其它生物多糖的结构和功能，此类多糖在医药和医学领域中应用潜力越来越引起人们对其的研究兴趣。但是，近几年大量研究发现，不同来源的微藻多糖具有不同的生物活性，单一多糖生物活性不能全面提升人体的免疫力。

螺旋藻(Spirulina platensis)是一类低等的古老生物，系属于蓝藻门(Cyanophyta)，段殖藻目(Oscillatoriaceae)，颤藻科(Oscillatoriales)，螺旋藻属(Spirulina)或节旋藻(Arthrospira),包括钝顶螺旋藻(S.platensis)和极大螺旋藻(S.maxima)等38个种类。作为地球上出现的最早进行光合作用的生物之一，螺旋藻已有35亿年的历史。

小球藻(Chlorella pyrenoidosa)是一种拥有坚硬细胞壁的单细胞真核生物，直径约3-12μm，系属于绿藻门(Chlorphyta)，绿藻纲(Chlorophyceae)，绿球藻目(Chlorella)，卵胞藻科小球藻属。小球藻广泛的分布在新鲜的淡水和海水中，生物量极大，能利用太阳光能进行自养，在异养条件下，也能利用有机碳源进行生长繁殖。

通过检索，尚未发现有将螺旋藻及小球藻结合用于抗肿瘤活性的研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种用于抗肿瘤的微藻硫酸酯化复合多糖及其制备方法。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

一种微藻硫酸酯化复合多糖，由硫酸酯化小球藻多糖：硫酸酯化螺旋藻多糖按1:16--16:1比例混合构成。

而且，所述的硫酸酯化小球藻多糖或硫酸酯化的螺旋藻多糖的制备方法为：

(1)称取5-10g硫酸铵晶体，缓慢加入到装有15-30mL正丁醇的烧杯中，磁力搅拌15-40min；然后加入15-30mL浓硫酸，磁力搅拌1-4h；

(2)准确称取1000mg小球藻多糖或螺旋藻多糖放入20-60mL甲酰胺制得悬浮液，与(1)所述溶液混匀磁力搅拌1-4h；

(4)调至溶液pH中性，蒸馏水透析2-4天，旋转蒸发浓缩后加入3-5倍体积的无水乙醇析出沉淀，冷冻干燥得硫酸化酯化多糖。

而且，所述的小球藻多糖或螺旋藻多糖的制备方法包括如下步骤：

(1)螺旋藻或小球藻细胞的破壁：将生长至平台期的螺旋藻或小球藻液离心，称取10-50g藻粉，加入100-800mL蒸馏水，将藻液低温冷冻结块，再80℃水浴加热6-10h解冻和破壁，重复上述过程3次，离心取上清，剩余藻泥震荡后加入蒸馏水超声破壁：500-1000W，每次1-3min，共10-30min，完毕后离心取上清。合并所有上清进行蛋白质等杂质的去除；

(2)去除蛋白质：调节溶液pH至中性并加入含量1％的中性蛋白酶，30-60℃条件下水浴3-5h，离心取上清调至pH值中性，加入1/5-1/2体积三氯甲烷和1/10-1/3体积的异戊醇，震荡10-15h去除杂质蛋白，重复3-5次直到无沉淀产生；

(3)粗多糖的纯化：