[发明专利]桔小实蝇ETH基因和其配体、受体及在实蝇特异性控制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种桔小实蝇ETH基因，序列如SEQ ID NO:9所示；还公开了该基因的扩增方法，采用巢式PCR，引物为ETH‑1‑F/ETH‑1‑R和ETH‑2‑F/ET‑H‑2‑R；还公开了桔小实蝇ETH配体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:12或13所示，编码氨基酸序列的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:10～11所示；还公开了桔小实蝇ETH受体的开放阅读框序列，如SEQ ID NO:14或15所示，还公开了其扩增方法，采用引物对ETH‑R‑A‑F/ETH‑R‑A‑R、ETH‑R‑B‑F/ETH‑R‑B‑R；还公开了桔小实蝇ETH基因及其配体、受体在在实蝇神经调节方面的应用。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种桔小实蝇ETH基因和其配体、受体及在实蝇特异性控制剂中的应用。

背景技术

柑橘是重要的经济作物，随着我国农业产业结构调整，柑橘产业规模不断扩大，已经逐渐成为多地区的支柱产业。桔小实蝇(Bactrocera dorsalis)由于其极强的环境适应能力和入侵扩散能力，严重危害多种重要经济果蔬，尤其是柑橘。目前，桔小实蝇已成为柑橘产业健康发展的巨大威胁。目前，桔小实蝇已对市面上的有机磷杀虫剂、拟除虫菊酯和阿维菌素等农药产生了严重的抗药性；农药残留严重污染环境，对食品安全造成了隐患；农药的特异性较低，威胁到有害生物天敌，有加剧农业有害生物爆发的风险。

蜕皮激素触发激素(Ecdysis Triggering Hormone,ETH)序列在不同种昆虫中具有较高保守性，其功能在昆虫中参与调控了蜕皮、交配、产卵、卵巢发育、生殖等多种生理活动。ETH受体具有两个选择性剪切子(ETH-R-A和ETH-R-B)属于G蛋白偶联受体(G-proteincoupled receptor，GPCR)家族。目前，50％以上的临床用药以及正在研发中的药物以GPCR为作用靶标。据统计，全球20种最畅销药物中就有12个以GPCR为靶标，每年的销售总额达500多亿美元。因此，该类受体的整个信号传递系统在药物开发和设计中占有极其重要的地位。然而目前昆虫中的GPCR作为农药靶标鲜有报道，在桔小实蝇中的应用更是鲜有。由于ETH在昆虫生理活动中的重要作用，以其受体(GPCR)作为潜在靶标创制害虫特异的杀虫剂来达到控制桔小实蝇的方法应该得到重视。

发明内容

本发明的目的是提供桔小实蝇ETH基因和其配体、受体及在实蝇特异性控制剂中的应用。

在本发明的一方面，提供一种桔小实蝇ETH基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

在本发明的另一方面，提供一种如SEQ ID NO:9所示的桔小实蝇ETH基因的扩增方法，包括如下步骤：提取桔小实蝇总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板采用巢式PCR的扩增方法，第一轮扩增的引物为ETH-1-F/ETH-1-R，第二轮扩增的引物为ETH-2-F/ETH-2-R，所述引物的序列为：

ETH-1-F：5’-ACAGTGTATGGGAACAAGCG-3’，

ETH-1-R：5’-TACCATATTCAATGCCCAAT-3’，

ETH-2-F：5’-AGAAAATATGCATTCCTCTTCGCT-3’，

ETH-2-R：5’-ATTCCTAATCTAGTTGATTGTAGC-3’。

在本发明的另一方面，提供一种桔小实蝇ETH配体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:12或13所示，编码所述SEQ ID NO:12～13所示的氨基酸序列的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:10～11所示。

在本发明的另一方面，提供一种桔小实蝇ETH受体的开放阅读框序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:14或15所示。