[发明专利]含有35个人类Y‑STR基于座的复合扩增检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子遗传学领域，具体来说是一种含有35个人类Y-STR基于座的复合扩增检测试剂盒。

背景技术

人类Y染色体属于性染色体，为正常男性所特有，其在遗传过程中不发生重组，其序列结构除突变外由父代不变的传递给子代，同一父系人群的Y染色体在理论上相同，而Y染色体的这一特性，使其在实际办案中，对性侵犯、伤害等案件中提取到的男女混合检材进行鉴定时，由于男性个体Y染色体遗传信息同时不受女性成分影响，Y染色体长期以来都是作为重要的研究检验对象被应用于法医物证检验。

短串联重复序列(STR,short tandemrepeats)扩增检测技术是目前应用最广泛、技术最成熟的Y染色体遗传信息检验技术，基于这一技术而开发的各种商业化试剂盒，应用较广的有Promega和ABI公司推出的Y-STR试剂盒，其主要是按照欧洲人群统计选择的基因座位点，不少基因座的多态性在中国人群中比较低，如在中国人群中多态性小于加之基因座数量少，造成了系统整体个体识别能力低，在法医鉴定的实际应用中有时会遇到瓶颈，特别是近年随着数据库的发展，比对样本基数的增加，Y-STR作为家系排查的主要比对指标，现有Y-STR检测系统识别率不足的缺点日益突出，或者由于Y-STR突变，造成家系比对无法确定或误判的情况。

因此，开发一种针对中国人群的基因座数量多、多态性高、性能稳定、操作简单和能同时检测更多基因座的Y-STR检测体系，成为我国法医物证检验鉴定的迫切需要。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的性能不稳定、操作复杂的缺陷，提供一种含有35个人类Y-STR基于座的复合扩增检测试剂盒来解决上述问题。

本发明公开了一种含有35个人类Y-STR基于座的复合扩增检测试剂盒，其特点在于：所述的基因座为DYS458、DYS460、DYS437、DYS439、DYS481、DYS385a/b、 DYS557a/b、DYS456、DYS391、DYS390、DYS635、DYS19、GATA_H4、DYS447、 DYS438、DYS389I、DYS448、DYS389II、DYS387、DYS518、DYS393、DYS576、DYS570、DYS392、DYS449、DYS527a/b、DYS444、DYS388、DYS643、SYS533、DYS549、DYS627。

作为优选，针对上述35个Y-STR基因座，在其重复序列的侧翼分别设计特异性荧光标记引物。

作为优选，所述的35个Y-STR基因座的引物序列如下表

作为优选，所述的35对Y-STR基因座的特异性扩増引物分为五组：

第一组：DYS458、DYS460、DYS437、DYS439、DYS481、DYS385a/b、DYS557 a/b；

第二组：DYS456、DYS391、DYS390、DYS635、DYS19、GATA_H4、DYS447；

第三组：DYS438、DYS389I、DYS448、DYS389II、DYS387、DYS518；

第四组：DYS393、DYS576、DYS570、DYS392、DYS449、DYS527a/b；

第五组：DYS444、DYS388、DYS643、SYS533、DYS549、DYS627。

将五组特异性扩増引物分别用蓝色FAM、绿色VIC、黄色NED、红色PET、和粉色荧光素HEX标记其5'端。试剂盒内设有内标，内标由一组大小固定且不同的DNA片段组成，内标用SIZ橙色荧光标记物。

作为优选，所述的含有35个人类Y-STR基于座的复合扩增检测试剂盒包括反应混合液、35对STR基因座的特异性扩増引物、35个基因座的等位基因、热启动Taq酶、DNA标准品、sdH20和荧光分子量内标。

作为优选，所述的含有35个人类Y-STR基于座的复合扩增检测试剂盒的具体成分为：

作为优选，所述的含有35个人类Y-STR基于座的复合扩增检测试剂盒的扩增反应体系为：

反应扩增程序为：94℃1min；94℃1min，60℃1min，72℃1min，共29 个循环；72℃10min。

本发明相比现有技术具有以下优点：

本发明提供了