[发明专利]一种猪伪狂犬病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪伪狂犬病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用，属于兽用生物制品领域。

背景技术

伪狂犬病毒属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、猪疱疹病毒属，病毒粒子为圆形，直径150～180nm，核衣壳直径为105～110nm。病毒粒子的最外层是病毒囊膜，它是由宿主细胞衍生而来的脂质双层结构。囊膜表面有长约8～10nm呈放射状排列的纤突。

伪狂犬病毒是疱疹病毒科中抵抗力较强的一种。在37℃下的半衰期为7h，8℃可存活46天，而在25℃干草、树枝、食物上可存活10～30天，但短期保存病毒时，4℃较-15℃和-20℃冻结保存更好。病毒在pH4～9之间保持稳定。5％石炭酸经2min灭活，但0.5％石炭酸处理32天后仍具有感染性。0.5％～1％氢氧化钠迅速使其灭活。对乙醚、氯仿等脂溶剂以及福尔马林和紫外线照射敏感。

伪狂犬病毒在全世界广泛分布。伪狂犬病自然发生于猪、牛、绵羊、犬和猫，另外，多种野生动物、肉食动物也易感。水貂、雪貂因饲喂含伪狂犬病毒的猪下脚料也可引起伪狂犬病的暴发。实验动物中家兔最为敏感，小鼠、大鼠、豚鼠等也能感染。关于人感染伪狂犬病毒的报道很少，并且都不是以病毒分离为报道依据。如土耳其及我国台湾曾报道有血清学反应阳性者。欧洲也曾报告数例因皮肤伤口接触病料组织而感染，主要表现为局部有发痒，未曾报告有死亡。最新的报道见于1992年，在波兰因直接接触伪狂犬病毒而感染的工人，首先是手部先出现短暂的瘙痒，后扩展至背部和肩部。

猪是伪狂犬病毒的贮存宿主，病猪、带毒猪以及带毒鼠类为本病重要传染源。不少学者认为，其他动物感染本病与接触猪、鼠有关。在猪场，伪狂犬病毒主要通过已感染猪排毒而传给健康猪，另外，被伪狂犬病毒污染的工作人员和器具在传播中起着重要的作用。而空气传播则是伪狂犬病毒扩散的最主要途径，但到底能传播多远还不清楚。人们还发现在邻近有伪狂犬病发生的猪场周围放牧的牛群也能发病，在这种情况下，空气传播是惟一可能的途径。在猪群中，病毒主要通过鼻分泌物传播，另外，乳汁和精液也是可能的传播方式。

除猪以外的其他动物感染伪狂犬病毒后，其结果都是死亡。猪发生伪狂犬病后，其临诊症状因日龄而异，成年猪一般呈隐性感染，怀孕母猪可导致流产、死胎、木乃伊胎和种猪不育等综合症候群。15日龄以内的仔猪发病死亡率可达100％，断奶仔猪发病率可达40％，死亡率20％左右；对成年肥猪可引起生长停滞、增重缓慢等。

疫苗接种是预防、控制甚至消灭伪狂犬病的主要措施之一。亚单位疫苗不含有核酸物质，安全性较好，接种后不会产生持续感染或潜伏感染，产生的免疫应答可以与野毒感染相区分，有利于疫病的控制和消灭，然而，目前研究的猪伪狂犬病病毒亚单位疫苗生产成本高，免疫原性不及弱毒疫苗及灭活疫苗，应用受到限制。可以说，缺少安全、有效的疫苗是目前预防和控制猪繁殖与呼吸综合征发生与流行的主要障碍，迫切需要安全、有效、廉价的新型疫苗。

发明内容

为解决现有技术不足，本发明创造性地将猪伪狂犬病毒变异株的gB、gC糖蛋白片段基因串联大肠杆菌耐热肠毒素(ST)及不耐热肠毒素(LT)融合基因片段STLT进行表达，生产了一种能够有效预防猪伪狂犬病毒感染的新型亚单位疫苗，疫苗免疫效果好。本发明提供的制备猪伪狂犬病毒亚单位疫苗的方法，成本低、生产效率高。

本发明提供的一种猪伪狂犬病毒病毒亚单位疫苗，包括免疫量的gB-STLT-gC重组蛋白。所述gB-STLT-gC重组蛋白是猪伪狂犬病毒gB蛋白片段、大肠杆菌耐热肠毒素(ST)及不耐热肠毒素(LT)、猪伪狂犬病毒gC蛋白片段的融合。

作为本发明的一种实施方式，所述猪伪狂犬病毒gB蛋白片段的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。

作为本发明的一种实施方式，所述猪伪狂犬病毒gC蛋白片段的氨基酸序列如SEQ IDNO:4所示。

作为本发明的一种实施方式，所述大肠杆菌耐热肠毒素(ST)及不耐热肠毒素(LT)的氨基酸序列如SEQ IDNO:5所示。

作为本发明的一种实施方式，所述猪伪狂犬病毒病毒亚单位疫苗还包括佐剂，例如SEPPIC公司的MONTANIDE ISA 206 VG佐剂。

作为本发明的一种实施方式，所述疫苗中gB-STLT-gC重组蛋白的抗原含量为50～100μg/mL。进一步地，所述疫苗组合物中gB-STLT-gC重组蛋白抗原含量为75μg/mL。

本发明提供的一种猪伪狂犬病毒病毒亚单位疫苗的制备方法，包括步骤：