[发明专利]一种活体海胆工业化粗纯毒素的方法

说明书

技术领域

本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种活体海胆工业化粗纯毒素的方法。

背景技术

海胆是一种低等的海洋无脊椎动物，属于棘皮动物门（Echinodermata）海胆纲（Echinoidea），具有较高的营养价值和潜在的药用价值。海胆的棘刺具有毒腺，能分泌蛋白毒素，海胆有壳，壳上有很多能动的棘或叉棘，大部分海胆的棘刺具有倒钩，可增加机械性损伤。被海胆棘刺伤后，局部可出现剧痛，随之细肿及有灼烧感，伤口呈紫色，1h后可疼痛减轻，但伤口紫色常可持续3～4d，重者伤口能继发感染或溃烂，经久不愈。全身还可出现眩晕、心悸、呼吸急促，重者可手足抽搐，发生麻痹。我国有8中含有蛋白毒刺的海胆，分别为环刺棘海胆、刺冠海胆、冠刺棘海胆、喇叭毒棘海胆、马粪海胆、白棘三列海胆、石笔海胆和饭岛囊海胆。从喇叭毒棘海胆中分离出一种肽类毒素，对平滑肌有激肽的行为，能使青心周血管产生暂时收缩，对平滑肌有明显收缩，表明其具有潜在的心血管药用价值。

目前获得海胆毒素的方法主要是直接从海胆或海胆干中提取，将海胆绞碎，加入有机溶剂进行萃取。此方法由于使用了有机溶剂，会对海胆中的敏感型蛋白毒素造成破坏，最终使提取的粗毒中蛋白类毒素减少。中国专利申请号200910249035.8名称为“从紫海胆壳中提取血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂的方法”的发明专利，取干燥的紫海胆壳，剪碎研磨后放入提取器中，先加入一定量的乙醇溶液或丙酮溶液浸泡，加热回流，弃去提取液；然后再用适量水加热提取，冷却后收集合并提取液，减压浓缩，冷冻干燥得紫海胆壳提取物，此方法获得的海胆提取物，含有血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂但也损失了大部分海胆毒素，造成了海胆毒素资源的浪费。本发明为了解决上述方法存在的问题，提供了一种更优化的提取海胆粗毒的方法。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种活体海胆工业化粗纯毒素的方法。

为实现上述发明目的，本发明公开的技术方案特征包含如下步骤：

a)淀粉凝固体制备：淀粉3～30%（w/w），增稠剂0～20%（w/w），纯化水补齐至100%（w/w），加热煮沸，期间不停搅拌，待无沉淀时，停止加热，入模（模底铺设尼龙网）晾至室温，即为淀粉凝固体；

b)覆网：在淀粉凝固体未完全凝固时，外测使用尼龙纱网固定，以增加淀粉凝固体的抗破损性能；

c)毒素收集：使用覆网淀粉凝固体模仿海胆天敌，接近海胆，诱导其进行防御行为，等待一段时间后回收覆网淀粉凝固体；

d)酶解：对回收的覆网淀粉凝固体进行解剖，取外层厚度1～10mm淀粉凝固体压碎，使用组氨酸修饰的淀粉酶，于20～35℃进行酶解，加入一定量的纯化水，酶解至无大块淀粉固体残留时停止，获得酶解液；

e)离心：保持4℃，对酶解液进行离心，以除去未酶解的残渣，保留离心上清液；

f)镍柱层析：保持4℃，将上清液进行循环上样于镍柱层析柱，保留最终的滤出液，除去淀粉酶，最后洗脱层析柱回收淀粉酶；

g)超滤除杂：保持4℃，使用截留量为1kD的水性膜对步骤f）中的滤出液进行超滤，除去盐、葡萄糖等小分子杂质，并对海胆毒素进行浓缩，保留超滤液即为海胆毒素粗纯液。

所述的淀粉包括但不限于玉米淀粉、马铃薯淀粉、红薯淀粉。

所述的增稠剂包括但不限于黄原胶、卡拉胶、明胶。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：不使有机溶剂获得的海胆毒素种类多；只对海胆毒性物质进行采集，不需杀死或伤害海胆，损害小，其再生毒素时间短，生产可持续性极具优势，为未来工业化利用海胆毒素提供了条件；收集的海胆毒素，受外界污染可能性小，为后续进一步纯化创造良好的基础。

具体实施方式

实施例1：