[发明专利]转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体旁侧序列及其应用

权利要求书

1.转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体左侧翼序列，其特征在于，所述左侧翼序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.转基因大豆W82-HAL1-8062转化事件外源插入载体右侧翼序列，其特征在于，所述右侧翼序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。

3.权利要求1所述的左侧翼序列或权利要求2所述的右侧翼序列在检测转基因大豆中的应用，所述转基因大豆的第1号染色体上第49468395位核苷酸处插入pCHAL1的T-DNA片段。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述转基因大豆为W82-HAL1-8062或由W82-HAL1-8062育种而成的转基因大豆。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，根据权利要求1所述的左侧翼序列或权利要求2所述的右侧翼序列设计用于检测所述转基因大豆的PCR引物对或杂交探针。

6.根据权利要求1所述左侧翼序列设计的PCR引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11所示。

7.根据权利要求2所述右侧翼序列设计的PCR引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示。

8.一种用于PCR的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求6或权利要求7所述引物对，以及其他试剂。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述其他试剂包括水、DNA聚合酶、dNTPs、PCR缓冲液、阳性对照品和阴性对照品中的一种或多种。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶为热启动Taq DNA聚合酶。

13.权利要求6-7任一项所述PCR引物对或权利要求8-12任一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述方法包括以待测样品的DNA为模板、权利要求6-7任一项所述引物对为上下游引物进行PCR扩增，根据PCR扩增产物判断所述样品的1号染色体上的第49468395位核苷酸处是否插入pCHAL1的T-DNA片段。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的退火温度为50-54℃，循环数为30-35。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的退火温度为52℃，循环数为35；或者，所述PCR反应的退火温度为48-50℃，循环数为30-35。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的退火温度为49℃，循环数为35。