[发明专利]使用定量PCR和数字PCR进行核酸检测的新颖制剂、方法和系统

权利要求书

1.一种用于鉴定来自从受试者获得的生物样品的靶核酸分子的存在与否，或相对量的方法，其包括：

(a)生成乳液，所述乳液包含氟化油、电子液体和基于月桂醚的表面活性剂，其中所述乳液包含多个小液滴，所述小液滴包含(i)来自所述受试者的所述生物样品的多个核酸分子，和(ii)进行脱氧核糖核酸(DNA)扩增和任选的逆转录扩增所需的试剂；

(b)对所述多个小液滴中的所述多个核酸分子在足以产生所述多个核酸分子的扩增产物的条件下进行所述DNA扩增；以及

(c)检测来自所述多个小液滴中的一个或多个小液滴的信号，其中所述信号指示所述多个核酸分子中的所述靶核酸分子的存在与否或相对量。

2.权利要求1的方法，其中所述DNA扩增是聚合酶链反应(PCR)。

3.权利要求1的方法，其中所述生物样品从所述受试者直接获得，未经预培养、非选择性富集、选择性富集、铺板于区分培养基、和/或预期性生物医学鉴定。

4.权利要求1的方法，其中所述生物样品来自所述受试者的组织或流体。

5.权利要求1的方法，其中(a)中的所述试剂包含生成所述信号的报告剂。

6.权利要求5的方法，其中所述信号的强度与所述多个核酸分子的所述扩增产物的量成比例。

7.权利要求5的方法，其中所述报告剂是染料。

8.权利要求7的方法，其中所述染料是荧光染料。

9.权利要求1的方法，其中所述小液滴包含包封于油相的水相，其中所述水相包含所述多个核酸分子和所述试剂。

10.权利要求1的方法，其中所述小液滴在高于95℃的温度下是稳定的，不发生变形或合并。

11.权利要求1的方法，其中包含于所述多个小液滴的所述多个核酸分子未经提取和/或纯化。

12.权利要求1的方法，其中所述乳液通过将水性的第一流体和非水性的第二流体混合来生成。

13.权利要求12的方法，其中所述乳液通过将水性的第一流体和非水性的第二流体混合以产生混合物，接着对所述混合物进行涡旋来生成。

14.权利要求1的方法，其中所述电子液体是电绝缘液体。

15.权利要求1的方法，其中所述电子液体是基于氟代烃的液体。

16.权利要求1的方法，其中所述电子液体包含全氟三戊胺。

17.权利要求1的方法，其中所述基于月桂醚的表面活性剂是乙醇酸聚氧乙基月桂醚。

18.权利要求17的方法，其中所述乳液还包含另一种表面活性剂。

19.权利要求18的方法，其中所述另一种表面活性剂是聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯。

20.权利要求1的方法，其中(b)包括与所述DNA扩增平行进行逆转录扩增。

21.权利要求1的方法，其中(b)包括(i)对所述多个核酸分子进行逆转录扩增以产生互补DNA(cDNA)分子，和(ii)对所述cDNA分子的至少一个子集进行与所述逆转录扩增平行的DNA扩增以产生所述扩增产物。

22.权利要求1的方法，其还包括将关于所述扩增产物的量的信息输出至接收者。

23.权利要求22的方法，其中所述信息作为报告输出。

24.一种用于鉴定来自从受试者获得的生物样品的靶核酸分子的存在与否，或相对量的系统，其包括：

小液滴生成器，其生成乳液，所述乳液包含氟化油、电子液体和基于月桂醚的表面活性剂，其中所述乳液包含多个小液滴，所述小液滴包含(i)来自所述受试者的所述生物样品的多个核酸分子，和(ii)进行脱氧核糖核酸(DNA)扩增和任选的逆转录扩增所需的试剂；

控制器，其与所述小液滴生成器可操作地连接，其中所述控制器被编程为(i)对所述多个小液滴中的所述多个核酸分子在足以产生所述多个核酸分子的扩增产物的条件下进行所述DNA扩增；以及(ii)检测来自所述多个小液滴中的一个或多个小液滴的信号，其中所述信号指示所述多个核酸分子中的所述靶核酸分子的存在与否或相对量。