[发明专利]一种蔗糖酶基因及其表达与应用

权利要求书

1.一种表达蔗糖酶基因的工程菌，其特征在于，菌株分类命名为

Pichia pastoris/pPIC9K-GspInv，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2017438，所述菌株中含有耐受高浓度蔗糖的蔗糖酶基因。

2.一种蔗糖酶基因，其特征在于，所述蔗糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

3.一种蔗糖酶，其特征在于，所述蔗糖酶的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。

4.含有权利要求2所述的蔗糖酶基因的重组表达载体。

5.含有权利要求2所述蔗糖酶基因的重组表达宿主菌。

6.一种制备权利要求3所述的蔗糖酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将权利要求1所述工程菌接种于BMGY液体培养基中，28℃、200rpm条件下培养至OD600＝2～6；离心菌体，用BMMY液体培养基重悬细胞至OD600＝1.0每隔24h加入甲醇使其中甲醇浓度为0.5％；将诱导后的发酵液经过过滤分离得到上清液，即是蔗糖酶粗制剂；

(2)将粗制剂放入超滤容器中，4～10℃条件下在磁力搅拌器上进行超滤浓缩，然后将浓缩液溶于磷酸盐缓冲溶液中，离心分离上清液后，用DEAE Sepharose ff离子交换柱纯化，洗脱缓冲液为0.3M(NH₄)₂SO₄，以5％，10％，20％，30％，40％，60％，80％，100％梯度洗脱，每次洗脱均冲至基线平稳，流速为1.0mL/min，最终获得纯化的蔗糖酶蛋白。

7.权利要求2所述的蔗糖酶基因在制备高浓度果糖糖浆中的应用。