[发明专利]一种建立制吴茱萸标准汤剂指纹图谱的方法

权利要求书

1.一种建立制吴茱萸标准汤剂指纹图谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取制吴茱萸，依次经浸泡、煎煮、滤过、浓缩、冷冻干燥后得到粉末，备用；

2）取步骤1）得到的粉末加水后进行超声处理，而后过滤，即得供试品溶液，备用；

3）取吴茱萸作为对照药材，重复步骤1）和步骤2）制得对照药材溶液，备用；

4）取绿原酸对照品加水制成绿原酸对照品溶液，备用；

5）分别精密吸取供试品溶液、对照药材溶液和绿原酸对照品溶液注入液相色谱仪中，分别测定三种溶液的指纹图谱；

6）以绿原酸对照品溶液色谱峰的保留时间为1，计算供试品溶液、对照药材溶液各峰的相对保留时间，用指纹图谱软件对所得的数据和图谱进行处理，即得制吴茱萸标准汤剂对照指纹图谱；

所述步骤1）中，浸泡、煎煮、滤过、浓缩、冷冻干燥的具体操作为：称制吴茱萸，将其用水浸泡30分钟，煎煮两次，第一次加水为制吴茱萸重量的8倍，煎煮30分钟，滤过，滤液备用；第二次加水为制吴茱萸重量的6倍，煎煮25分钟，滤过，滤液备用；将两次煎煮得到的滤液合并减压浓缩，直至形成投料量：浓缩液质量为1:1的清膏后，先在-40℃、40Pa条件下预冻1h，而后在-50-60℃、15-25Pa条件下冻干成粉末；所述投料量：浓缩液质量投料量是指，称取的制吴茱萸重量与最后形成的清膏重量比例为1:1；

所述步骤1）中制吴茱萸在浸泡之前先经过以下处理：将制吴茱萸浸泡在温度为50-60℃的乙酸钠、硫酸钾、维生素C和谷氨酸的乙醇溶液中2-4h，浸泡结束后，采用600-800MHz的微波对其进行处理2-3min，而后过滤并用清水清洗，即完成对制吴茱萸的处理；所述乙酸钠、硫酸钾、维生素C和谷氨酸的乙醇溶液是指，按照重量比，取4-6份的乙酸钠、3-5份的硫酸钾、1-2份的维生素C和2-3份的谷氨酸与40-50份的乙醇溶液混合形成；

所述步骤5）中，指纹图谱测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇和质量浓度0.1%的磷酸溶液，检测波长为254nm，柱温为30℃，采集75min的检测数据；流动相梯度洗脱程序如下：将甲醇用A表示，质量浓度0.1%的磷酸溶液用B表示，则在0-40min，流动相为体积分数为2-30%的A和体积分数为98-70%的B，在40-70min，流动相为体积分数为30-75%的A和体积分数为70-25%的B，在70-71min，流动相为体积分数为75-100%的A和体积分数为25-0%的B，在71-75min，流动相为A。

2.根据权利要求1所述的一种建立制吴茱萸标准汤剂指纹图谱的方法，其特征在于，所述步骤2）中供试品溶液的具体制备方法为：精密称定步骤1）制得的粉末0.4 g，精密加入水25mL，称定重量，以170KHz的超声频率超声处理30min，冷却后再次称定重量，用水补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液再用0.45微米的微孔滤膜滤过，滤液即为供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的一种建立制吴茱萸标准汤剂指纹图谱的方法，其特征在于，所述步骤4）中绿原酸对照品溶液的具体制备方法为：取绿原酸适量，精密称定，加水制成每1毫升溶液中含绿原酸30微克，即得绿原酸对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的一种建立制吴茱萸标准汤剂指纹图谱的方法，其特征在于，所述步骤6）中的制吴茱萸标准汤剂对照指纹图谱的共有峰不少于21个。