[发明专利]一种铁磁性纳米载体材料/基因复合物及其制备方法和应用有效
申请号: | 201710686283.3 | 申请日: | 2017-08-11 |
公开(公告)号: | CN107513537B | 公开(公告)日: | 2019-12-31 |
发明(设计)人: | 凌代舜;张添源;高建青 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | C12N15/87 | 分类号: | C12N15/87 |
代理公司: | 33224 杭州天勤知识产权代理有限公司 | 代理人: | 陈华 |
地址: | 310013 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 铁磁性 纳米载体材料 基因复合物 静电吸引作用 阳离子聚合物 油酸 聚已内酯 中间层 两层 制备方法和应用 纳米立方体 四氧化三铁 高效基因 目的基因 外加磁场 油酸修饰 内核 疏水 吸附 修饰 转染 | ||
1.一种铁磁性纳米载体材料/基因复合物,其特征在于,所述铁磁性纳米载体材料/基因复合物为层层包覆结构,包括铁磁性纳米载体材料以及通过静电吸引作用依次吸附在铁磁性纳米载体材料上的目的基因和第二阳离子聚合物;
所述铁磁性纳米载体材料包括:内核为四氧化三铁纳米立方体,中间层采用聚已内酯和油酸修饰,外层通过静电吸引作用修饰第一阳离子聚合物;所述中间层包括两层油酸以及连接两层油酸疏水端的聚已内酯;所述四氧化三铁纳米立方体、聚已内酯和油酸的质量比为8~12:2~5:1;所述四氧化三铁纳米立方体的边长为22~35nm。
2.根据权利要求1所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物,其特征在于,所述目的基因为质粒DNA、功能性信使RNA或小干扰RNA。
3.根据权利要求1所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物,其特征在于,所述第一阳离子聚合物为支状聚乙烯亚胺、线状聚乙烯亚胺、精胺、聚赖氨酸、丙二胺、壳聚糖或β-氨基酯。
4.根据权利要求1所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物,其特征在于,所述第二阳离子聚合物为支状聚乙烯亚胺、线状聚乙烯亚胺、精胺、聚赖氨酸、丙二胺、壳聚糖或β-氨基酯。
5.一种如权利要求1~4任一所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)通过热分解法,利用油酸还原乙酰丙酮铁,得到四氧化三铁纳米立方体;四氧化三铁纳米立方体的边长为22~35nm;
2)将四氧化三铁纳米立方体分散于混合溶剂中,分别加入聚已内酯和油酸,反应得到能在水相体系中稳定分散的铁磁性纳米立方体;所述四氧化三铁纳米立方体、聚已内酯和油酸的质量比为8~12:2~5:1;
3)将溶解有过量第一阳离子聚合物的混合溶剂加入到步骤2)中的铁磁性纳米立方体的反应体系中,经相转化反应后得到表面带正电荷的铁磁性纳米载体材料;
4)将步骤3)中的铁磁性纳米载体材料与目的基因在室温下共孵育,使铁磁性纳米载体材料与目的基因通过静电吸引作用相结合;
5)继续加入第二阳离子聚合物溶液,并在室温下共孵育,得到层层包覆结构的铁磁性纳米载体材料/基因复合物。
6.根据权利要求5所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物的制备方法,其特征在于,所述步骤4)中铁磁性纳米载体材料与目的基因的质量比为0.1~0.6。
7.根据权利要求5所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物的制备方法,其特征在于,所述步骤4)中共孵育时间为10~30min,所述步骤5)中共孵育时间为10~30min。
8.根据权利要求5所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物的制备方法,其特征在于,所述步骤4)中共孵育是指:将灭菌处理后的铁磁性纳米载体材料和目的基因分别用蔗糖水或磷酸缓冲液配制成溶液,混合后室温下共孵育。
9.一种如权利要求1~4任一所述的铁磁性纳米载体材料/基因复合物在干细胞基因转染中的应用。
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