[发明专利]一种标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球及其应用

权利要求书

1.一种标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1用1-(3-二甲基氨基丙基)-3乙基碳二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液分别对荧光微球液进行活化，得到荧光微球活化混合物；

S2将步骤S1中的荧光微球活化混合物放入透析袋中，在磷酸盐缓冲液中透析除去多余的1-(3-二甲基氨基丙基)-3乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，得到透析后的荧光微球液；

S3将步骤S2透析后的荧光微球液里加入氨基聚乙二醇羧基，37℃搅拌反应1-3小时，在弱酸性N-吗啉乙磺酸缓冲溶液中进行第二次透析，除去多余的氨基聚乙二醇羧基，得到二次透析后的荧光微球液；所述氨基聚乙二醇羧基分子量为1000～5000 Da；

S4将步骤S3二次透析后的荧光微球液通过加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3乙基碳二亚胺再次活化，再加入抗体于2-8℃下反应8-12小时，加入牛血清白蛋白封闭，离心沉淀，再将沉淀用磷酸盐缓冲液PBS重悬，离心沉淀，用荧光微球复溶液重悬，即制得标记特异性高亲和力抗体的荧光微球；所述荧光微球复溶液为含有0.1-1.5wt％明胶或BSA、0.01-1wt％曲拉通X-100、0.05-0.1wt％叠氮钠、0.01-0.2mol/L pH 6.5-8.5磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：步骤S1中所述荧光微球液的荧光微球粒径为250-350nm，固含量1％；所述1-(3-二甲基氨基丙基)-3乙基碳二亚胺溶液浓度为10-100mg/ml；所述N-羟基琥珀酰亚胺溶液浓度为10-100mg/ml；所述荧光微球液、1-(3-二甲基氨基丙基)-3乙基碳二亚胺溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液体积比为100：1-2：1-2。

3.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：步骤S2与步骤S4中所述的缓冲液为10-100mmol/L pH 7.2-7.6的磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：步骤S3中所述荧光微球液里氨基聚乙二醇羧基终浓度10-100mmol/L。

5.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：步骤S3中所述的弱酸性N-吗啉乙磺酸缓冲溶液为0.1mol/L pH 4.5-6.1的N-吗啉乙磺酸缓冲溶液。

6.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的抗体为鼠抗人KIM-1重组单克隆抗体或羊抗兔IgG多克隆抗体。

7.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的抗体为鼠抗人NGAL重组单克隆抗体或羊抗兔IgG多克隆抗体。

8.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的抗体为鼠抗人IGFBP-7重组单克隆抗体或羊抗兔IgG多克隆抗体。

9.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的抗体为鼠抗人TIMP-2重组单克隆抗体或羊抗兔IgG多克隆抗体。

10.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的抗体为鼠抗人IL-18重组单克隆抗体或羊抗兔IgG多克隆抗体。

11.根据权利要求1所述标记特异性高亲和力抗体的荧光微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的抗体为鼠抗人PCT重组单克隆抗体或羊抗兔IgG多克隆抗体。