[发明专利]人膀胱癌标志物AG-CD71及其抗体ABC71和应用

说明书

本发明主要属于肿瘤免疫学技术领域，具体涉及一种新型膀胱癌标志物AG‑CD71，以及抗AG‑CD71的单克隆抗体ABC71。本发明所述人膀胱癌标志物AG‑CD71，其为异常糖基化的转铁蛋白受体TFRC，所述异常糖基化的转铁蛋白受体TFRC是指TFRC上带有作为抗原表位的糖结构Fuca1‑4(GlcNAcb1‑3)[6OSO3]GlcNAc；并提供一种针对所述的人膀胱癌标志物AG‑CD71的抗体，所述抗体为特异性抗人膀胱癌AG‑CD71的单克隆抗体ABC71，该单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.14312的杂交瘤细胞株分泌。细胞和组织学水平证明：ABC71特异性识别人膀胱癌细胞及人膀胱癌组织。抗人膀胱癌的单克隆抗体ABC71，该抗体与人膀胱癌组织呈强阳性反应，而与人正常膀胱组织呈阴性反应。

技术领域

本发明主要属于肿瘤免疫学技术领域，具体涉及一种新型膀胱癌标志物AG-CD71，以及抗AG-CD71的单克隆抗体ABC71。细胞和组织学水平证明：ABC71特异性识别人膀胱癌细胞及人膀胱癌组织。本发明还涉及一个免疫细胞化学检测人膀胱癌的方法。该检测方法所检测的抗原为本发明中的人膀胱癌新型标记物AG-CD71，检测抗体为本发明中抗人膀胱癌AG-CD71的单克隆抗体ABC71。

背景技术

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一，占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位，在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。在我国，由于人口老龄化加重、吸烟人群增多、工业化进程和环境污染加剧，膀胱癌发病率呈逐年上升趋势，总体发病率居男性恶性肿瘤第6位，居泌尿系统肿瘤第1位，男性发病率是女性的4倍，发病率随年龄增长而增加，严重危害着我国人民群众的健康。

目前膀胱癌诊断及随访主要依靠尿道膀胱镜检，但是侵入性的尿道膀胱镜费用昂贵且操作不便，不仅给患者带来较大痛苦，还存在感染、出血等风险。尿液是膀胱癌理想的肿瘤标记物来源。寻找一种N能够通过尿液来检测膀胱癌的高效、简便、快速、灵敏的诊断方法很有必要。

转铁蛋白受体TFRC是细胞表面一种跨膜糖蛋白，分子量约为180kD，由两个同源二聚体亚基通过两条二硫键交联而成。TFRC参与铁的吸收与细胞生长调节，是维持人体正常铁代谢的重要介质。所有正常有核细胞都有低水平的表达，而在高增殖率的细胞中表达水平较高，特别是肿瘤细胞可能由于其对铁的需求增加其表达增加更为显著。近年来，TFRC逐渐成为肿瘤疾病基础和临床研究的一大热点。

因此，基于TFRC的异常糖基化可导致肿瘤细胞恶性程度的改变，探究膀胱癌中TFRC的异常糖基化，为膀胱癌的筛查、诊断、预后判断及治疗提供一种新的靶点，对于膀胱癌的诊断和治疗将具有极其重要的意义。

发明内容

本发明从新鲜的人膀胱癌组织中提取总蛋白免疫小鼠，制备杂交瘤细胞株。用ELISA的方法筛选到一株能与人膀胱癌组织特异性结合的抗体ABC71，该抗体属于IgG1亚类。免疫组织化学证实，ABC71抗体与人膀胱癌组织呈强阳性反应，而与人正常膀胱组织无交叉反应。

本发明通过免疫沉淀结合质谱与糖芯片结果鉴定，ABC71抗体识别的抗原是一种异常糖基化的TFRC，其定位于细胞膜上，其表位为：Fuca1-4(GlcNAcb1-3)[6OSO3]GlcNAc，属于全新的膀胱癌标志物。本发明将ABC71抗体偶联辣根过氧化物酶(HRP)，制备成辣根过氧化物酶标记的抗膀胱癌抗体(ABC71-HRP)，与尿液里脱落的膀胱癌细胞结合后，经DAB显色、苏木素染色涂片，在显微镜下进行镜检。该试剂盒适用于膀胱癌病人的早期筛查、预后监测及病理辅助诊断。

本发明技术方案：