[发明专利]促癌基因JCAD及其作为靶点在制备治疗肝癌的药物中的用途

说明书

本发明属生物医药技术领域具体涉及促癌基因JCAD及其作为靶点在制备治疗肝癌的药物中的用途。经试验表明，本发明的潜在促癌基因JCAD在HCC细胞系及临床样本中高表达，在癌症发生过程中与LATS2发生相互作用并且抑制LATS2磷酸化YAP，使后者的磷酸化水平低下，通过Hippo信号通路促进肝癌细胞的增殖；本发明公开了具干扰作用的shRNA序列，其干扰JCAD在细胞中的表达，本发明还包括重组慢病毒介导JCAD过表达及相应JCAD过表达细胞株。本发明的促癌基因JCAD有助于肝癌疾病的发病机制研究，能作为肝癌治疗的新靶点为制备治疗肝癌的药物。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，涉及促癌基因JCAD及其用途，具体涉及 促癌基因JCAD及其作为靶点在制备治疗肝癌的药物中的用途。本发明的促癌基 因JCAD有助于肝癌疾病的发病机制研究，能为进一步开发针对肝癌的药物提供 重要的参拷数据。

背景技术

资料显示，肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界第五常见恶性 肿瘤，也是全世界癌症相关死亡的第三大病因。据统计，全世界每年大约有 700,000死于癌症，其中一半都在中国。临床研究显示，HCC预后差，5年生存 率低于15％，其中，大多数患者在确诊时已经失去了手术根治机会，而化疗对 HCC效果甚微，迄今，尚没有单个药物或者联合药物可以延长生存。因此，有 关探索HCC的分子及细胞机制并寻找可用于治疗HCC的靶位点等的重要性， 已被业内认可。

有研究显示，肝癌相关基因JCAD在肝癌组织及细胞系中呈高表达，而其对 HCC的起始、进展及转移的影响及作用机制目前未见报道。基于此，本申请的 发明人拟提供肝癌相关基因(亦称促癌基因)JCAD及其用途，尤其是促癌基因 JCAD及其作为靶点在制备治疗肝癌的药物中的用途。

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的现状，提供肝癌相关基因(亦称促癌基因)JCAD及其用途，尤其是促癌基因JCAD及其作为靶点在制备治疗肝癌的药物中 的用途。本发明有助于肝癌疾病的发病机制研究，能为进一步开发针对肝癌的药 物提供重要的参拷数据。

本发明提供了肝癌相关基因(亦称促癌基因)JCAD(junctional proteinassociated with coronary artery disease)或KIAA 1462(NM_020848)；该JCAD在 肝癌组织及细胞系呈高表达状态，具有促进增殖的作用；

本发明还提供了干扰JCAD表达的重组慢病毒及高表达JCAD的重组慢病 毒，其中，所述干扰JCAD表达的重组慢病毒，其命名为Lenti-shJCAD。其含特 异shRNA干扰序列：

CCGGGCCTGAGTTGCACGGAAATTCCTCGAGGAATTTCCGTGCAACTCAG GCTTTTTG；

本发明所述的干扰JCAD的shRNA序列可以化学合成，干扰效率高，对肝 癌有潜在的治疗作用。

本发明还提供了一种过表达JCAD的重组慢病毒载体，其命名为 pLVX-IRES-puro-JCAD，该病毒载体其通过：将JCAD基因序列重组克隆到质粒 pLVX-IRES-puro中，用双酶切位点(Xho I和BamH I)完成构建。

本发明进行了JCAD在肝癌中促增殖作用实验，其中，

体外实验：在肝癌细胞系Huh-7，Huh-7-Trans，HLE和HLF中，JCAD被 shRNA慢病毒干扰后，肿瘤细胞的增值能力降低，平板克隆形成实验(Colony formation assay)和瘤球形成实验(spheroid formation)显示，受干扰细胞系成瘤 能力(克隆形成数、瘤球数)显著降低，而在JCAD高表达慢病毒感染后，肝癌 SMCC-7721细胞的增值能力和瘤球形成均呈相反的结果；